C hepatīta PCR diagnostika

C hepatīts ir aknu šūnu iekaisums, kas rodas, inficējoties ar HCV vīrusu (C hepatīts), saskaroties ar inficētās personas asinīm. Flavivīrusa HCV ģenētisko kodu vada RNS (ribonuclenic acid) molekula, kas atrodas vīrusa struktūrā. Šī dzīvībai bīstamā parādība atšķiras ar noslēpumu patoloģijas sākumposmā. Laika intervāls starp infekciju un simptomu rašanos (imūnsistēmas reakcija) var būt no viena mēneša līdz sešiem mēnešiem. Parasti slimība ir hroniska un to ir grūti izārstēt.

Mūsdienu medicīna ļauj diagnosticēt patoloģiju ar nelieliem aknu bojājumiem. Visizplatītākās un efektīvākās diagnostikas metodes ietver PCR analīzi. Šajā rakstā apsveriet, kas tas ir un kādi ir tā veidi.

Kas ir pētījums

C hepatīta PCR analīze ir laboratoriska izmeklēšana, kas atklāj ribaviru, kas ir ribonuklēnskābes (RNS) ģenētiskais materiāls. Tas nosaka RNS molekulu skaitu asinīs, bioloģiskā materiāla kvalitāti, HCV vīrusa ģenētisko tipu.

C hepatīta PCR metode ļauj konstatēt minimālo flavīrusa daudzumu pirms antivielu veidošanās, parasti pēc inficēšanās.

Pētījumu bieži dēvē par RNS analīzi, jo tā atklāj flavavīrusa ribonukleīnskābes daļiņas ar izmēru 30-60 nm.

Pētījums tiek veikts šādi: tukšā dūšā pacients dod asinis no vēnas, ko pēc tam pārbauda ar dažādām metodēm:

• Reālā laika PCR tiek veikts slēgtā automatizētā veidā un tam ir zemāks RNS vīrusa noteikšanas limits, kas vienāds ar 15 SV / ml;
• COBAS AMPLICOR ar jutību 50-100 SV / ml.

Jo augstāks ir diagnostikas metodes jutīguma slieksnis, jo lielākas ir iespējas atrast zemāko vīrusa saturu pētāmajā bioloģiskajā materiālā.

Kāda veida analīzes izmanto

Analīzi, kas veiksmīgi izmantota jau vairākus gadu desmitus, sauc par PCR hepatītu, un to var viegli un ātri noteikt. Medicīnā ir divas reakcijas metodes, kas būtiski atšķiras viena no otras:

• kvalitatīvā metode atklāj konkrēta vīrusa ģenētiskā avota klātbūtni bioloģiskajā materiālā;
• kvantitatīvā analīze nosaka ģenētiskā materiāla skaitu, kas ļauj noteikt patoloģijas stadiju vai novērtēt terapeitiskā kursa efektivitāti;
• genotipa noteikšana nosaka organisma klātbūtnes veidu.

Kopumā asins analīzes palīdz noteikt virēmijas raksturu un patogēna ģenētisko tipu. Parasti pētījumi tiek veikti 1 reizi atkarībā no diagnostikas sistēmas jutības pakāpes. Ja nepieciešams, atkārtotu pārbaudi veic, izmantojot ultrasensīvu reaģentu.

Augstas kvalitātes PCR

Kas ir augstas kvalitātes PCR RNS C hepatītam? Reakcijas būtība ir hepatīta RNS sekvences klātbūtnē, un reakcija ir iespējama tikai ar līdzīgu etimoloģiju saturošu vīrusu proteīnu klātbūtnē ELISA. Salīdzināšanas procesā tiek konstatēta slodze un iespējamais aknu zonas bojājums.

Šīs metodes īpatnība ir spēja noteikt pat atsevišķa gēna klātbūtni.

Jāatzīmē, ka pēc PCR un ELISA testu rezultātu saņemšanas pacientam ir nepieciešama atbilstoša ārstēšana neatkarīgi no tā, kāds bija galīgais imunoloģiskās analīzes rezultāts. Pozitīvs norāda uz infekciju, un PCR negatīvs norāda uz samazinātu vīrusu daļiņu skaitu attiecībā pret jutības līmeni.

Ir vairāki apstākļi, kas ietekmē negatīva PCR un ELISA ražošanu:

• piemērotu materiālu savākšanas apstākļu trūkums;
• iegūtā analīze satur piesārņojumu;
• ja pacientam tiek veikta agrīna heparīna injicēšana.

Pacientam nav jāievēro daži noteikumi par asins paraugu ņemšanu PCR analīzei, šajā gadījumā šīs analīzes kvalitāte ir atkarīga no medicīnas speciālista, kas veic procedūru. Spēja noteikt slimības klātbūtni (īpaši akūtā formā) parādās dažu nedēļu laikā pēc infekcijas.

Kvantitatīvā analīze

Vīrusu slodzes noteikšanai tieši pirms turpmākās terapijas veidošanās un ķermeņa reakcijas ieteicams veikt kvantitatīvu testu. Asins paraugu ņemšanas process tiek veikts līdzīgi kā ar augstas kvalitātes PCR un ELISA, vienīgais nosacījums ir pacienta smēķēšanas trūkums pirms procedūras.

Attiecībā uz datiem, kas iegūti, pētot datus, palielināto slodzi raksturo rādītāji no 800000 SV / ml, zems - 400000 SV / ml. Vīrusa klātbūtne pacienta organismā ir norādīta ar PCR hepatīta gadījumā nav negatīvs kvalitatīvs tests.

Šāda veida pētījumi ļauj noteikt, cik bīstams pacients ir ap viņu apkārtējiem cilvēkiem. Piemēram, augsta līmeņa noteikšana norāda uz paaugstinātu pacienta inficētspēju. Turklāt analīzes rezultāti palīdz formulēt turpmāko visefektīvāko ārstēšanu un noteikt, cik liela ir esošā terapija.

Ātrā negatīvā reakcija uz testiem liecina par izvēlētās tehnikas panākumiem, un lēni norāda uz nepieciešamību veikt pielāgojumus un izmantot daudzpusīgu apstrādi.

Analīzes procedūras veikšanas process ir atkarīgs no konkrētās slimības norises dienas. Pirmā noteikšana tiek veikta pirmajā dienā pēc pacienta uzņemšanas slimnīcā, tad procedūra tiek atkārtota 4, 12 un 24 nedēļās pēc zāļu lietošanas.

Tādējādi kvantitatīvā analīze parāda, kura ārstēšana ir visefektīvākā, pieejamā terapijas ilgums un pacienta briesmas attiecībā pret citiem cilvēkiem.

Genotipēšana

Materiālu analīzes pētījumā ir svarīgi noteikt vīrusa genotipa precizitāti, kas notiek. Pašlaik ir 11 C hepatīta vīrusa šķirnes, kas savukārt ietver noteiktas pasugas.

Visas šīs sugas atšķirīgi reaģē uz dažādām ārstēšanas metodēm, un atsevišķas šķirnes ir absolūti izturīgas pret daudzām zālēm.

Genotips ļauj noteikt un parādīt aknu stāvokli. Nav nekas neparasts, ka rezultāti ir „nav tipizēti”, kas nozīmē, ka ar šo testu sistēmu vīruss pacienta asinīs netiek konstatēts. To var noteikt, ja konkrētais genotips neatbilst šai zonai. Šādā situācijā analīze tiek veikta atkārtoti, un materiāla izpētei tiek izmantota jutīgāka sistēma.

Ļoti jutīga metode

Ultrasensitīvā metode ir nepieciešama dažos gadījumos, kad hepatīta diagnozi nevar veikt ar citām metodēm, tajā pašā laikā, kad analīzi izdara ārstējošais ārsts:

• ja Jums ir aizdomas par C hepatīta vīrusa klātbūtni pacientiem, kuriem ir slēpta slimības klase;
• antivielu pret C hepatīta vīrusu klātbūtne, kas nav apstiprināta ar PCR diagnostiku;
• lai noteiktu izvēlētās ārstēšanas metodes efektivitātes kvalitāti un apstiprinātu slimības likvidēšanu.

Šīs metodes jutīgums ir daudz augstāks nekā parasti izmantotais, tomēr šī metode neizslēdz viltus rezultātu iegūšanu, gan pozitīvus, gan negatīvus. Šādā situācijā ir svarīgi kontrolēt procedūras kvalitāti un paša materiāla inficēšanās iespēju.

PCR analīzes skaidrojums

Analīzes dekodēšana tiek veikta, pamatojoties uz iesniegtajiem materiāliem, bet laboratorijas pētījumu rezultāti ietver dažus iepriekš aprakstītos datus.

Transkripts var ietvert pozitīvu PCR polimerāzes ķēdes reakciju un negatīvu ELISA testu, kas nozīmē, ka pacientam asinīs nav C hepatīta pazīmju, bet agrāk viņš ir pārnesis slimības akūtu formu. Parasti, diagnosticējot, speciālisti izmanto PCR testu indikatorus.

Apkopojot visu iepriekš minēto, var secināt, ka analīzes laikā ir svarīgi ievērot visus noteikumus un ieteikumus, lai iegūtie rezultāti būtu pēc iespējas precīzāki, un, pamatojoties uz iegūtajiem datiem, ir iespējams noteikt izmantotās terapijas efektivitāti un turpmākās atgūšanas iespējas.

C hepatīta kvalitatīvā analīze

2017. gada 8. marts, 12:29 Ekspertu raksti: Nova Vladislavovna Izvčikova 0 10 547

Polimerāzes ķēdes reakcijas kvalitatīvā analīze - C hepatīta PCR nosaka HCV klātbūtni vai neesamību organismā. Laboratorijas apstākļos tiek pētīta RNS struktūra, kas ietver vīrusu. Vīrusa C atklāšanas gadījumā nepieciešams veikt ārstēšanas kursu, jo novārtā atstātās aknu stāvoklis radīs smagas sekas. Pēc reģenerācijas tiek veikta augstas kvalitātes PCR, lai apstiprinātu antivielu neesamību. Iecelts un regulāri pārbauda. Tā kā asinsķermenīšu koncentrācija asinīs ir zema, PCR (kvalitatīvs) neko nevar atklāt, jo diagnostikas sistēmai ir savi jutīguma sliekšņi. Sākotnējā slimības stadijā vai vieglā formā PCR veic ultradiagnostika ultra-jutīgās iekārtās.

Kas ir RNS vīruss?

C hepatīta vīrusa (vai C hepatīta vīrusa RNS) termins RNS ir pati aknu slimība. Vīruss C saistās ar veselīgu ķermeņa šūnu, iekļūstot tajā. Laika gaitā, izplatoties visā ķermenī, ir nepieciešams tikai nokļūt asinīs. Rezultātā patogēns iekļūst aknās, drošina savas šūnas un darbojas smagi. Aknu šūnas (hepatocīti) darbojas tās ietekmē, mainās, un no tā viņi mirst. Jo ilgāk vīruss C ir aknās, jo lielāks ir šūnu skaits. Laika gaitā attīstās bīstamas slimības, kas izraisa ļaundabīgu deģenerāciju un nāvi.

Aknu infekcija ar šāda veida vīrusu var izpausties ārēji. Daudzus gadus vai gadu desmitus inficētā persona jūtas pilnīgi veselīga, un tikai nejauša pārbaude visbiežāk atklāj patoloģiju. Ziedojot asinis hepatīta gadījumā, tiek pārbaudīta daļa no RNS (ribonukleīnskābes) ķēdes, kas ir daļa no cilvēka gēna (DNS). Laboratorijas testu rezultātus nevajadzētu izmantot pašapstrādei, jo tas ir tikai indikators. Precīzu attēlu un turpmāko diagnozi labāk nosaka ārsts.

Kad tas ir izdarīts: pētījuma indikācijas

Apstiprinot HCV, tiek veikta PCR analīze (polimerāzes ķēdes reakcija). PĶR pētījumi palīdz atrast RNS struktūras izraisītāju un izrakstīt efektīvu terapiju. Iecelts šādos gadījumos:

• aknu iekaisuma pazīmju noteikšana;
• skrīninga pētījumi profilaksei;
• kontaktu pārbaude;
• jauktas izcelsmes hepatīta diagnoze (galvenā patogēna noteikšana);
• noteikt vīrusa reproduktīvās aktivitātes līmeni hroniskā formā;
• aknu ciroze;
• noteikt noteiktās ārstēšanas efektivitāti.

Pētījuma PCR nosaka ārstu, lai noteiktu hepatīta ārstēšanas kursa efektivitāti.

Ir kvalitatīva un kvantitatīva PCR analīze. Kvantitatīvais PCR parāda RNS procentuālo daudzumu ar vīrusa nesējiem asinīs, un kvalitatīvs norāda uz vīrusu klātbūtni vai neesamību. Pozitīvam kvalitātes rādītājam (C hepatīta RNS klātbūtnei) ir vajadzīgs arī kvantitatīvs pētījums. C hepatīta izraisītāja augsts koncentrācijas līmenis ir saistīts ar tā pārnešanas risku, tas ir, citu infekciju. Zemie numuri ir labāk ārstējami. RNS vīrusu daudzums asinīs nav saistīts ar slimības intensitāti. PCR analīze tiek veikta arī interferona terapijas gadījumā, lai noteiktu ārstēšanas kursa ilgumu un sarežģītību.

C hepatīta augstas kvalitātes PCR analīzes iezīmes

Kvalitatīvai analīzei ir piešķirts polimerāzes ķēdes reakcijas indikators visiem pacientiem, kuriem ir asins C hepatīta antivielas. Ieteicams veikt hepatīta B analīzi, tad pozitīva secinājuma gadījumā un par hepatītu D. Arī kvalitatīvi analizēta reakcija jāveic kopā ar citām asins analīzēm. Analīzēs tiks parādīts pilnīgs vīrusu izplatīšanās attēls.

No testa rezultātiem ir redzams vai negatīvs tikai pozitīvs C hepatīta tests, tas ir, vīrusa klātbūtne vai neesamība. Ja izeja ir "atklāta", tad vīruss ir un joprojām ir aktīvs. Apzīmējums "nav atklāts" norāda uz vīrusa trūkumu vai tā nelielo daudzumu. Ar šo rādītāju jāatceras, ka diagnostisko sistēmu analītiskā jutība ir atšķirīga un ka RNS hepatīts C joprojām var būt asinīs, bet tas nav izpaužas analīzē.

Īpaši jutīga PCR metode atklāj ļoti hepatītu C pat nelielos daudzumos. Tiek izmantots fluorescences hibridizācijas pētījums, kas ir daudzkārt lielāks nekā standarta PCR sistēmas. Šo metodi izmanto vairākos gadījumos:

• iespējamas C hepatīta slēptās formas;
• PCR diagnostika neapstiprināja patogēnu, bet ir antivielas;
• atgūšanas gadījumā;
• lai atklātu agrīnu infekciju.

Atpakaļ uz satura rādītāju

Dekodēšanas analīze

HCV PCR dekodēšana ietekmē galīgo lēmumu, veicot diagnozi, jo īpaši ar ultrametodu. Šā pētījuma galvenais trūkums ir stingri ievērot parauga un materiālu sterilos apstākļus. Neliela novirze dažkārt rāda neprecīzus analītiskus secinājumus, sarežģī diagnozi un turpmāku ārstēšanu. PCR analīze hepatīta RNS noteikšanai ne vienmēr pārliecinoši parāda slimības attēlu, dažreiz ir pieļautas neprecizitātes un abos virzienos.

Diagnozējot hepatīta vīrusu, ieteicams izmantot visaptverošu pārbaudi.

Rādītāju norma

Analizējot polimerāzes ķēdes reakciju, pētījuma rezultātos JgM antivielu trūkums pret C hepatītu ir uzskatāms par normu. Vienlaikus seroloģiskās analīzes rezultāti liecina par C vīrusa antivielu klātbūtni, un tas ir arī normālā diapazonā. Kvalitatīvā definīcija neliecina par slimības intensitāti, tā atklāj tikai C hepatīta izraisītāju RNS. Šo analīzi atkārto pēc apstrādes, lai apstiprinātu faktisko reģenerāciju.

Novirzes

Ja ir klāt JGM antivielas pret HCV RNS, tas norāda uz attīstības infekciju. Vienlaikus slimība notiek akūti vai hroniski, kas izpaužas dažādos posmos. Ja tiek reģistrēta antivielu skaita samazināšanās, analīze liecinās, ka ārstēšanas rezultāti tika sasniegti atveseļošanās laikā. Diagnostikā ir ļoti reti viltus pozitīvi konstatējumi. Tās ir sastopamas sievietēm grūtniecības laikā un cilvēkiem ar citām infekcijas slimībām.

Diagnostika ar C hepatīta PCR

Ne visi zina, kāpēc viņi izmanto C hepatīta diagnostikas metodi. Viena no visbiežāk sastopamajām slimību grupām ir kuņģa-zarnu trakta infekcijas slimības. Visbiežāk skar kuņģi (čūlas), zarnas (kolīts, enterīts) un aknas (hepatīts).

Visu iepriekš uzskaitīto orgānu vidū vislielākais slogs uzliek aknām. Ķermenī aknu loma ir ārkārtīgi svarīga:

1. Gandrīz visas vielmaiņas reakcijas notiek aknās (tas ir, ja tiek veidoti visu veidu vitāli svarīgie komponenti, kas ļauj organismam pilnībā darboties).
2. Aknas ir galvenais detoksikācijas orgāns. Ar tās palīdzību (jo īpaši ar žulti) tiek noņemti daudzi substrāti, kas var izraisīt intoksikāciju un izraisīt nopietnas sekas.

Diemžēl daudzi cilvēki nekontrolē savu veselību, tāpēc aknas sāk ciest. Parasti attīstās dažādu etioloģiju (vīrusu, toksisku) hepatīts.

Hepatīta definīcija

Vīrusu hepatīts ieņem svarīgu vietu starp aknu slimībām. Slimības gaitas smaguma pakāpe, ārstēšanas sarežģītība liek tiem pirmo vietu starp šīs orgāna cita veida patoloģiju.

Visi hepatīti ir sadalīti akūtos un hroniskos. Hepatīts A un B ir klasificēti kā akūti, pirmkārt, hroniskā C hepatīta gadījumā.

Šo slimību izraisa C hepatīta vīruss, kas raksturīgs tam, ka slimība var ilgt ilgi bez klīniskām izpausmēm.

Tas tiek pārsūtīts galvenokārt caur asinīm. Ar asins plūsmu vīruss iekļūst aknās, kur tas sāk vairoties šūnās. Virionu uzkrāšanās rezultātā notiek inficēto hepatocītu iznīcināšana. Atbildot uz to, sāk veidoties antivielas, kas sāk uzbrukt hepatocītu atliekām. Tāpēc laika gaitā tiek veidots baseins pret aknu šūnām, kas saasina slimības gaitu.

Sakarā ar to, ka slimība ir viegla asimptomātiska vai asimptomātiska, un klīniskās pazīmes parādās tikai tad, ja šūnas ir būtiski ietekmētas, šī slimība prasa izveidot diagnostikas metodes, lai noteiktu tās klātbūtni un veiktu atbilstošus pasākumus.

C hepatīta diagnostika: kvalitatīvas un kvantitatīvas analīzes

Pašlaik C hepatīta diagnozei tiek izmantotas tādas metodes kā aknu biopsija un imunogramma.

Tie ļauj tieši noteikt inficēto hepatocītu (aknu biopsiju) vai specifisku antivielu klātbūtni pret skartajām šūnām (imunogrammu). Tomēr ir metode, kas ļauj droši noteikt vīrusa klātbūtni. Tā ir PCR - polimerāzes ķēdes reakcija.

Šīs metodes būtība ir tā, ka noteiktos apstākļos notiek RNS ķēžu ražošana. Tas ir saistīts ar to, ka attiecīgajā asinīs vai biopsijā ir vīrusa daļiņu fragmenti. Savienojot tos ar vidē esošām molekulām, notiek ķēdes, kas papildina vīrusu RNS. Turpmākajā analīzē un salīdzinājumā ar C hepatīta vīrusa zināmo nukleotīdu secību ir iespējams noteikt, vai vīruss atrodas organismā un vai ir aknu bojājums.

PCR tiek veikta pēc specifisku antivielu noteikšanas pret hepatīta vīrusu asinīs. Pēc testa veikšanas rezultāts - RNS tiek “atklāts” vai “nav konstatēts”. Reizēm viņš var teikt „nepietiekamu materiālu” - šajā gadījumā ir nepieciešams atkārtoti pārbaudīt C hepatītu.

Ja vīrusu daļiņu skaits ir mazāks par nepieciešamo minimālo daudzumu, tad mēs varam teikt, ka nav hepatīta, un minimālu ģenētiskā materiāla daudzumu var “sajaukt” ģenētiskā materiāla vai dažu nukleotīdu secību, kas varētu sakrist ar vīrusu, mimikizācijas dēļ.

1. Izmantojot PCR, var novērot negatīvu rezultātu, ja asinīs ir patiešām vīrusa daļiņas, bet tās ir tik mazas (pēdējā laikā inficēšanās notika vai analīzei sekoja ilgstoša un intensīva pretvīrusu terapija), ka testēšanas sistēma vienkārši nevarēja noteikt to koncentrāciju normāli. RNS - "nav konstatēts."
2. Ja PCR ir pozitīvs rezultāts, tad asinīs ir tik daudz vīrusu daļiņu, ka to skaits pārsniedz testa sistēmas zemāko jutības slieksni. Šajā gadījumā pastāv liels risks saslimt ar infekcijas procesu (vai tas jau ir diezgan progresīvā posmā). Parasti liels daudzums vīrusa jau ir indikācija ārstēšanai un turpmākai aknu transplantācijai.

Dažreiz tests var kļūt par viltus pozitīvu vai nepatiesu.

Gadījumā, ja reakcijas vidē ir dažas sastāvdaļas, kas kavē vīrusa daļiņu kopiju veidošanos, tiek novērots viltus negatīvs hepatīta PCR rezultāts. Šī iemesla dēļ nav iespējams iegūt patiesu priekšstatu par asins stāvokli, kas veicina vīrusa izplatīšanos un slimības progresēšanu. Heparīna klātbūtne asinīs var ietekmēt arī reakciju (samazinot asins relatīvo viskozitāti). Nepareiza analīzes interpretācija ir iespējama pat tad, ja nav izpildīti izmeklējamā materiāla transportēšanas un uzglabāšanas nosacījumi.

Varbūtēji pozitīvi rezultāti, kad tiek diagnosticēts C hepatīts, PCR visbiežāk rodas, ja caurule vai darba vide ir piesārņota. Turklāt pozitīvus rezultātus var novērot ar citu grupu hepatīta vīrusu klātbūtni (krusteniskās reakcijas dēļ).

PCR kvalitatīvā analīze hepatīta C noteikšanai

Liela skaita krioglobulīnu klātbūtne asinīs tieši ietekmē arī PCR. Tādēļ pirms C hepatīta testēšanas obligāti jānosaka to koncentrācija asinīs, lai iepriekš konstatētu rezultāta izkropļojumus un novērstu to.

Pēc šīm pārbaudēm kļūst skaidrs, vai asinīs ir vīrusu daļiņas. Nosakot tos, ieteicams nekavējoties sākt pretvīrusu terapiju, lai palēninātu procesa progresēšanu. Atšķirībā no B hepatīta nav pilnīgas C hepatīta ārstēšanas; slimība nonāk tikai slēptajā posmā un sāk turpināties lēnāk. Aknu bojājumi ir neizbēgami. Procesa pēdējā posmā, kad aknas vairs nespēj tikt galā ar savu funkciju, var būt nepieciešama tās transplantācija.

Ārstēšanu veic galvenokārt ar divām zālēm - interferonu un ribavirīnu.

Pierādīja to efektivitāti, palēninot hepatocītu sakāves procesu. Pa ceļam infūzijas terapija obligāti ir paredzēta aknu darba atvieglošanai.

Visi pacienti, kuriem ir palielinājies vīrusu daļiņu skaits asinīs, obligāti jāreģistrē hepatologam. Vairākas reizes gadā tām ir ieteicams veikt profilaktisku pārbaudi, lai noteiktu procesa virzību un savlaicīgu transplantācijas indikāciju atklāšanu. Turklāt ir iespējams izmantot hepatoprotektorus, kaut arī ārstu viedokļi nedaudz atšķiras. Daži uzskata, ka šīs zāles ļauj apturēt šo procesu un aizsargāt vēl neskartos hepatocītus; citi ir pārliecināti, ka nav jēgas tos lietot, un jāveic intensīva pretvīrusu terapija.

Tādējādi C hepatīts pieder pie slimību kategorijas, kuru identificēšana rada dažas grūtības. Diagnostikas metožu uzlabošana, kā arī savlaicīga profilaktiska pārbaude samazinās šīs slimības biežumu. Svarīga ir arī šīs slimības profilakse. Vajadzētu rūpīgi izvairīties no kontakta ar asinīm, atteikties lietot narkotikas, tikai tad šī slimība tiks izskausta. Galvenais profilaksē un ārstēšanā ir pacienta apzināta attieksme pret viņu veselību.

PCR analīzes veikšana attiecībā uz C hepatītu un rezultātu dekodēšana

C hepatīta PCR analīze ir pētījums, kura galvenais mērķis ir identificēt izraisītāja ģenētisko materiālu. Analīze atklāj slimības izraisītāju, izmantojot polimerāzes ķēdes reakciju. Šai diagnozei ir augsta precizitātes pakāpe, specifiskums, lai noteiktu vīrusu infekcijas neesamību vai klātbūtni.

Diagnozes būtība

Lai veiktu PCR analīzi C hepatīta vīrusa noteikšanai no pacienta, tiek ņemta vēnu asinis, kas potenciāli satur vēlamā vīrusa HCV (ribonukleīnskābi).

C hepatīta PCR tests ietver procedūru pacienta asins daļiņu pievienošanai:

• gruntis (īstermiņa mākslīgi sintezēti nepieciešamā gēna reģioni);
• īpašs enzīms (RNS polimerāze).

Pēc paraugu ņemšanas bioloģiskais materiāls tiek nosūtīts pētniecībai laboratorijā. Vienai daļai asiņu ir nepieciešama tiešai PCR analīzei, otru nosūta testēšanai ar ELISA. Enzīms īsā laikā spēj palielināt patogēna vīrusa ģenētiskā materiāla skaitu. Īpašā aparātā tiek veikti vairāki siltuma un dzesēšanas procesu cikli. Noslēguma posmā iegūtais materiāls tiek salīdzināts ar vīrusa gēniem un izdarīts secinājums par patoloģijas esamību vai neesamību pacienta organismā.

PCR analīzes būtība un vadība laboratorijā. Filmēts Sibīrijas medicīniskajā laboratorijā.

Pētījumu veidi

Ir 3 diagnostikas veidi, kas ļauj noteikt C hepatīta vīrusa klātbūtni cilvēka organismā:

• genotipizēšana;
• kvalitāte;
• kvantitatīva.

Kvalitatīvā metode

C hepatīta diagnosticēšana ar kvalitatīvu metodi ir piemērojama pacientiem, kuriem asins analīzē konstatētas antivielas pret vīrusu. HCV RNS akūtās fāzes klātbūtnē šādi diagnostikas pasākumi var noteikt slimības klātbūtni 1-2 nedēļu laikā pēc inficēšanās. Šajā laikā antivielas pret C hepatītu vēl nav iespējams attīstīt.

Kvantitatīvā metode

Lai noteiktu vīrusa koncentrāciju asins paraugos, tiek izmantota kvantitatīva diagnostikas metode. Šāds virēmijas tests (koncentrācijas pakāpe) ļauj precīzi noteikt vīrusu RNS vienību skaitu. Galarezultāts ir izteikts atbilstošajā apjomā. Ja runājam par kvantitatīvu analīzi, tad rādītājus mēra 1 ml (1 kubs Cm).

Vīrusu slodzes parametrs ir slimības infekciozitātes līmenis, tas ir, tas atspoguļo pacienta "infekcijas" pakāpi. Praksē tas nozīmē, ka jo lielāks ir vīrusa koncentrācijas līmenis asinīs, jo lielākas iespējas pacientam inficēt citus ar C hepatītu. Kvantitatīvā pētījuma metode arī ļauj noteikt ārstēšanas kvalitāti un efektivitāti.

Genotipēšana

Genotipēšana atklāj slimības izraisītāja mutācijas. Pirms ārstēšanas plāna izrakstīšanas nosaka vīrusa genotipu: no tā atkarīga ārstēšanas kvalitāte un ilgums. Piemēram, I tipa slimības ārstēšanā efektivitāte ir 60%, II gadījumā - III tipa - apmēram 80%.

Hepatīta PCR analīzes priekšrocības

Viena no galvenajām procedūras priekšrocībām ir:

1. Iespēja agrīnai diagnostikai. PCR analīze spēj noteikt vīrusa klātbūtni infekcijas agrīnā stadijā.
2. Zems kļūdu rezultāts. Pētītais bioloģiskais resurss ļauj diagnosticēt ģenētiskā materiāla daļu, kas raksturīga tikai vienam vīrusu infekcijas veidam. Šis apstāklis ​​ļauj novērst viltus diagnostikas rezultātus.
3. Augsta jutīguma pakāpe. PCR analīze spēj noteikt vīrusa RNS nelielos daudzumos, kas arī ļauj izsekot latentās infekcijas laikā.

Norādes

Nepieciešams veikt C hepatīta PCR testēšanu, ja tas ir pieejams:

• saskarē ar slimiem cilvēkiem, kas var izraisīt infekciju;
• aknu cirozes simptomi (liesas palielināšanās, neraksturīgas izmaiņas aknu lielumā, vēnas plexus atklāšana uz vēdera zem ādas);
• pozitīvi ELISA rezultāti;
• paaugstināta AST un ALT aktivitāte (izpaužas asins bioķīmiskajā analīzē);
• nepieciešamību kontrolēt pretvīrusu terapijas veikšanu;
• ārstēšanas sākumposms, lai noteiktu vīrusu slodzi;
• veikt galīgo terapijas posmu, lai izslēgtu iespējamās atkārtošanās;
• pacientam ir B hepatīts, lai izslēgtu jauktu aknu bojājumu attīstību.

Kā sagatavoties asins ziedošanai PCR pētījumiem

Sagatavošanās PCR analīzei ietver šādus ieteikumus:

• asinis tiek ņemtas no rīta;
• analīze tiek veikta tukšā dūšā, tāpēc ir ieteicams pārtraukt starp pēdējo pārtikas devu 8-10 stundām;
• dažas dienas pirms diagnozes izslēdziet taukainus, pikantus un ceptus ēdienus, alkoholiskos dzērienus un smēķēšanu;
• vienu dienu pirms analīzes vajadzētu atturēties no smagas fiziskas slodzes, izslēgt nodarbības sporta zālē vai peldbaseinā.

Analīzes rezultāti: normas un novirzes

Analīze pati par sevi nav ilgtermiņa, un augsti kvalificēts speciālists hepatologs vai infekcijas slimību speciālists atšifrē C hepatīta PCR rezultātus. Pamatojoties uz analīzes rezultātiem, tiek diagnosticēts pacients.

Lai pareizi izskaidrotu aptaujas rezultātus, tās ņem vērā rādītājus:

• asins bioķīmiskā analīze;
• ultraskaņas dati;
• biopsijas rezultāti.

Kvantitatīvās analīzes interpretācija

Iegūstot PCR kvantitatīvās analīzes rezultātus, ņem vērā šādus rādītājus:

PCR metode C hepatīta noteikšanai

PCR ir polimerāzes ķēdes reakcija, ko izmanto, lai noteiktu C hepatīta klātbūtni serumā, un rezultāts var būt pozitīvs un negatīvs.

PCR metodes priekšrocības

Šai diagnostikas metodei ir šādas priekšrocības:

1. PCR metode ļauj noteikt šādus rezultātus:
   • RNS vīrusa klātbūtne;
   • radiācijas pakāpe;
   • sākotnējā ģenētiskā informācija;
   • ģenētisko datu unikalitāte un unikalitāte.
2. Jūs varat izmantot jebkuru nepieciešamo klīnisko materiālu:
   • asinis;
   • plazma;
   • urīns;
   • ķermeņa šķidrumi un izdalījumi;
   • krēpas un citi.
3. Atšķirībā no citiem paraugiem ļauj noteikt asinīs vairāk nekā vienu mikroorganismu.
4. Rezultātu iegūšana 24 stundu laikā.
5. Vienkāršotas metodes analīzes uzglabāšanai un transportēšanai, patogēni tiek noteikti pat mirušā vidē.
6. PCR unikalitāte ļauj identificēt dažus mikroorganismus, kas nav piemēroti citiem paraugiem.
7. Reaģentu augsta jutības pakāpe, tests ir visprecīzākais.

PCR kvalitatīvās analīzes iezīmes

Veic kvalitatīvu testu, lai noteiktu vīrusa klātbūtni asinīs un iegūtu negatīvu vai pozitīvu rezultātu.

Šīs diagnozes indikācija ir C hepatīta antivielu noteikšana pacienta organismā.

Iespējamie rezultāti:

• konstatēts (pozitīvs);
• nav konstatēts (negatīvs).

Kvalitātes tests nav piemērots pacientiem ar ļoti zemu vīrusa daudzumu asinīs, tāpēc tam ir noteikta jutība.

Rezultāts "atklāts"

Hepatīta C vīrusa noteikšana var būt dažas nedēļas pēc organisma inficēšanās, pat ja nav antivielu pret šo patogēnu. Šis rezultāts norāda uz C hepatīta raksturīgo RNS fragmenta klātbūtni organismā un asins grupā.

Pacients tiek uzskatīts par inficētu ar šo vīrusu un tiek tālāk izplatīts patogēnās šūnas organismā.

Rezultāts "nav konstatēts"

Šī iespēja liecina, ka pētāmā bioloģiskā materiāla paraugā nav C hepatīta specifisko RNS fragmentu. Tas ir negatīvs rezultāts.

Testa jutīgums neatspoguļo zemo RNS fragmentu saturu, tāpēc rezultāts “nav konstatēts” ne vienmēr ir ticams.

Rezultātu interpretācijas iezīmes

Rezultātu interpretācijas galvenā iezīme ir PCR metodes sliekšņa jutība.

Tas ir atkarīgs no šādiem rādītājiem:

• pētījuma precizitāte;
• izmantoto iekārtu veidu un kvalitāti.

Jāatzīmē, ka jutība var mainīties robežās no 10 līdz 500 SV / ml. No tā izriet, ka, ja pētāmā pacienta ķermenī ir vīruss, kura koncentrācija ir mazāka par 10 SV / ml, testā tiks parādīts rezultāts “nav konstatēts”. Bet tas nenozīmē, ka patogēns pilnīgi nav klāt.

Diagnostikas sistēmu varianti

Šobrīd diagnostikas sistēmām ir šādas iespējas:

1. Ja asinis ņem no pacienta, kas saņem pretvīrusu terapiju, jāizmanto diagnostikas sistēmas ar jutību vismaz 50 SV / ml. Šim nolūkam izmanto šādus analizatorus:
   • Cobas Ampicolor HCV tests;
   • RealBest HCV RNS.
2. Lai galīgi diagnosticētu C hepatītu, ir nepieciešams noteikt RNS vīrusu trīs dažādos bioloģisko materiālu paraugos. Šos ieteikumus izstrādā Pasaules Veselības organizācija. Ja rezultāts ir trīs reizes negatīvs, diagnoze netiek apstiprināta.
3. Pašlaik papildus PCR metodei ir precīzāks tests, ko sauc par TMA (transkripcijas pastiprināšanas metode). Tās jutības slieksnis ir daudz augstāks nekā citās diagnostikas metodēs.

Atklāto vīrusu modifikāciju diapazons

Šajā ģenētikas attīstības posmā ir zināmi vairāki vīrusu modifikācijas veidi un varianti.

Laboratorijas diagnostika mūsu valstī ar absolūtu precizitāti var noteikt šādus genotipus:

PCR kvantitatīvās analīzes iezīmes

Kvantitatīvā analīze ir C hepatīta vīrusa definīcija cilvēka organismā. Pētījuma laikā RNS un vīrusa slodze izejmateriālā tiek noteikta ar PCR. Pretējā gadījumā mēs varam teikt, ka tests ļauj noteikt, cik vīrusu šūnas ir bioloģiskajā šķidrumā. Šāda veida pētījumiem tiek izmantota tikai vēnu asinis. Nav specifiska testa preparāta.

Kvantitatīvā analīze ļauj jums jau uzsāktajā ārstēšanas stadijā uzraudzīt un novērtēt tā efektivitāti. Novērtēšanai testēšanas datus veic pirms terapeitiskās iejaukšanās un tās laikā. Ar iegūto rezultātu palīdzību iespējams prognozēt slimības gaitu.

Pēc veiksmīgas ārstēšanas metodes pēc 3 mēnešiem RNS daudzumam vajadzētu samazināties vairākas reizes. Saskaņā ar ieteikumiem kvantitatīvā analīze tiek veikta pēc viena, pēc tam pēc trim un sešiem mēnešiem. Pēdējam ārstēšanas rezultātam jābūt negatīvam.

Kvantitatīvā PCR testa rezultātu novērtēšana

Mūsu valstī ir divas iespējamās iespējas kvantitatīvā PCR testa rezultātu novērtēšanai:

• kopiju skaits uz bioloģiskā šķidruma mililitru;
• starptautisko vienību skaits uz mililitru.

Lai iegūtu starptautiskas vienības, kopiju skaits tiek dalīts ar 4.

• augsts ar PCR virs 800000 SV / ml;
• zems ar PCR zem 400 000 SV / ml.

Kvantitatīvā testa rezultāts nodrošina divas iespējas:

• "Zem mērījumu diapazona";
• "Nav konstatēts" (negatīvs).

Vērtējums: “zem mērījumu diapazona”

Šāds secinājums ir izdarīts, ja kvantitatīvais RNS tests nenovēro C hepatīta izraisītāju šūnu izcelsmes materiālā, bet vīruss joprojām ir asinīs. Analīzes ticamību apstiprina kvalitatīvā metode, jo kvantitatīvā testa jutības slieksnis nevar atklāt mazas patogēna vērtības un koncentrācijas.

Reitings: "nav konstatēts"

Šāds secinājums ir izdarīts, kad C hepatīta RNS vīrusi diagnostikas laikā netika atklāti izejmateriālā.

Kvantitatīvā PCR testa analīzes rezultātu interpretācija

Vīrusu slodzes indikatora izmantošana nosaka:

• slimības nevērības pakāpe;
• cik inficējošs ir pacients;
• pretvīrusu terapijas efektivitāti.

Jo augstāks ir C hepatīta vīrusa līmenis organismā, jo bīstamāks ir pacients citiem cilvēkiem un jo progresīvāka ir viņa slimība.

C hepatīta PCR ir svarīga diagnostikas metode, īpaši terapijas laikā. Pateicoties iegūtajiem negatīvajiem vai pozitīvajiem rezultātiem, ir iespējams novērtēt to efektivitāti, pilnībā izārstēt pacientu vai saīsināt ārstēšanas laiku.

C hepatīta PCR analīze

Lai diagnosticētu "hronisku C hepatītu (CVHS)", nepieciešama visaptveroša personas pārbaude, kas ietver klīniskos, laboratorijas un instrumentālos pētījumus. No diagnozes viedokļa svarīga ir pareiza diagnoze ir PCR metode - polimerāzes ķēdes reakcija.

Ko parāda šī analīze un kāpēc tas ir nepieciešams?

Šī laboratorijas metode nosaka C hepatīta vīrusa RNS cilvēka asinīs. Kopā ar imūnsistēmu, kas saistīta ar fermentu, ELISA, lai noteiktu vīrusa antivielas, PCR izmanto, lai diagnosticētu CVHC un tā patogēnu genotipu. Šis pētījums ir viena no jaunākajām laboratorijas diagnostikas metodēm. Tās uzticamība CVHS pārsniedz 97%, kas tiek uzskatīts par ļoti labu pētījumu rādītāju.

CVHS ir trīs PCR asins analīzes: kvalitatīva, kvantitatīva un vīrusa genotipēšana. Pirmais vīrusa pētījums (kvalitatīvā analīze) to atklāj asinīs, tāpēc to izmanto tikai diagnosticēšanai.

Otrais (kvantitatīvais) pētījums nosaka vīrusa slodzes pakāpi organismā, tāpēc to izmanto, lai uzraudzītu terapijas efektivitāti.

Trešais PCR (genotipa noteikšana) precizē diagnozi, nosakot vīrusa genotipu, kas ir ļoti svarīgs pareizas pretvīrusu ārstēšanas iecelšanai.

Polimerāzes ķēdes reakcijas metodes būtība ir tādu fermentu izmantošana, kas vairo patogēna ģenētisko materiālu biomateriālā. Šādas replikācijas procesā cauruli ar asinīm vairākas reizes karsē un atdzesē līdz temperatūrai, kas nepieciešama, lai paātrinātu enzīmu reakciju. Šo manipulāciju rezultātā vīrusa genoma daudzums palielinās daudzas reizes, ļaujot to konstatēt pat ar minimālu daudzumu.

PCR diagnostikai ir daudz priekšrocību salīdzinājumā ar citiem laboratorijas testiem:

• augsta jutība - 97-98%;
• garantēta analītiskā specifika (atklāj tieši to patogēnu, kuru vēlaties atrast, nevis tā saistīto celmu);
• veikšanas ātrums (secinājumu iegūšanai nepieciešams ne vairāk kā 2 dienas).

Triju veidu PCR testi

Visiem pacientiem, kuriem ELISA analīze atklāja HVGS vīrusa antivielas, tiek piešķirta augstas kvalitātes PCR analīze. Pēc augstas kvalitātes PCR veikšanas var iegūt divas atbildes iespējas: "tiek konstatēta" RNS "vai" RNS nav konstatēta. " Lai noteiktu minimālo vīrusa daudzumu asinīs, ir vajadzīgas testēšanas sistēmas, kuru jutība ir vismaz 50 SV / ml. Ja vīrusa koncentrācija pacienta asinīs ir mazāka nekā diagnosticum var noteikt, pētījuma rezultāts var būt kļūdains. Lai izvairītos no šādas diagnostikas kļūdas, laboratorijām, kas veic PCR diagnostiku, jānodrošina ļoti jutīgas testēšanas sistēmas. Laboratorijā "Invitro", piemēram, tiek izmantoti testi, kuru jutība ir 15 SV / ml. Laboratorijas darbiniekiem ir pienākums sniegt informāciju par testu jutīgumu pacientiem un ārstiem pēc pirmā pieprasījuma.

PCR kvantitatīvā analīze nosaka virēmijas pakāpi, ti, patogēna koncentrāciju asinīs, vīrusu slodzi. Šī pētījuma rezultāts, atšķirībā no augstas kvalitātes PCR, ir izteikts skaitļos, piemēram, 2 × 10 * 6 SV / ml, kas nozīmē 2 miljonus starptautisko vienību 1 ml asinīs. Dažas laboratorijas izmanto citu rādītāju - kopiju skaitu / ml. Šie divi rādītāji ir viegli konvertējami: 1 starptautiska vienība ir 4 RNS kopijas. Tādējādi 2 × 10 * 6 SV / ml nozīmē, ka 8 × 10 * 6 vīrusu RNS kopijas 1 ml, t.i. 8 miljoni kopiju 1 ml asins.

Genotipēšana ir viena no sešiem vīrusa genotipiem. Klīniskais attēls, aknu komplikāciju attīstības ātrums un prognoze pacienta turpmākajai dzīvei ir atkarīga no ierosinātāja genotipa. Vīrusa genotips ir ļoti svarīgs jau diagnozes stadijā, jo zāļu kombinācija un pacientam piešķiramā terapeitiskā kursa ilgums ir atkarīgs no tā pareizas noteikšanas.

Tomēr pat šim šķietami „ideālajam” laboratorijas pētījumam ir savi trūkumi:

• pētījums atkārto visu patogēnu, pat nedzīvo, ģenētisko materiālu, kas var izkropļot rezultātu. Tādēļ, lai uzraudzītu efektivitāti ar PCR palīdzību, atkārtota analīze tiek veikta ne agrāk kā 2 mēnešus pēc iepriekšējās analīzes, lai mirušie vīrusi varētu atstāt pacienta organismu;
• daļa no vīrusa genoma, ko nosaka, izmantojot testēšanas sistēmas, teorētiski var būt citos vīrusos vai mikroorganismos, tāpēc pastāv viltus pozitīva reakcija;
• vīrusi ātri mainās. Dažreiz vīrusa mutācijas ātrums un apjoms ir tik liels, ka testa sistēma pārtrauc savu genoma nozveju. Tā rezultātā ir iespējams kļūdains negatīvs rezultāts.

Lai novērstu šos trūkumus, laboratorijas testēšanas sistēmu ražotāji PCR diagnostikai pastāvīgi veic testus, tostarp savstarpējas reakcijas un jutīgumu pret konkrētu vīrusa genotipu.

Kā lietot C hepatīta PCR testu?

Lai PCR pārbaudes noslēgšana būtu ticama, ir stingri jāievēro noteikumi, lai sagatavotos tam:

• pētījums tiek veikts tukšā dūšā (glikoze, tauki, minerāli, kas nokļūst asinīs no pārtikas, var ietekmēt fermenta reakcijas ātrumu un kvalitāti);
• starpība starp pēdējo ēdienu un asins paraugu ņemšanu analīzei ir jābūt vismaz 8 stundām;
• pētījuma priekšvakarā ir aizliegts lietot alkoholu un patērēt taukainus pārtikas produktus, kuru likvidēšanas periods ir ilgstošs;
• dienā pirms došanās uz laboratoriju jāizvairās no spēcīga fiziska un emocionāla stresa;
• līdz asins paraugu ņemšanas laikam nav ieteicams smēķēt.

Lai izvairītos no nepareizu secinājumu parādīšanās, apgalvotajam pacientam laboratorijā ir jādodas nedaudz agrāk, nekā tiks ņemts asinis. Tas aizņem 15-20 minūtes, lai cilvēks noķertu elpu, nomierinātu. Adrenalīns, kas asinīs atrodas pēc ātras pastaigas, var ietekmēt izmeklēšanas rezultātu.

Ja pacientam, kuram tiek veikta analīze, jāveic jebkādas zāles, par to viņam jāinformē ārsts. Iespējams, ka daži no tiem kādu laiku būs jāatsaka (ja iespējams).

C hepatīta PCR analīzes rezultāts

Analīzes veikušās laboratorijas laboratorijas ārsta dekodēšana. Dekodēšana ir no normas iegūto rezultātu novirzes noteikšana. Rādītāju rādītāju nosaka tieši testēšanas sistēmas ražotājs, ko laboratorija izmanto diagnostikai. Tādēļ nav pārsteidzoši, ka dažās laboratorijās vīrusa slodzi nosaka SV / ml, bet citās - kopijās / ml.

Pēc secinājuma saņemšanas ir nepieciešams, lai to varētu pareizi interpretēt. Pētījuma rezultātu apstrādi veic ārstējošais ārsts no C hepatīta. Tikai pēc objektīvas, instrumentālas un laboratoriskas pacienta pārbaudes, ārsts var iegūt pietiekamu datu daudzumu, lai pareizi interpretētu iegūtos PCR rezultātus.

Kvalitatīvās analīzes novērtēšana parasti nerada grūtības pat pacientiem. Rezultāts var būt tikai viens: "atklāts" vai "nav atklāts". Šajā gadījumā otrā no tām ir norma.

Kvantitatīvās analīzes rādītājus ir grūtāk interpretēt. Tas parāda pacienta vīrusu slodzes pakāpi. Pat hepatologu vidū nav vienprātības par to, kā ārstēt atklāto virēmiju. Lielākā daļa ārstu sliecas uzskatīt, ka jāapsver liela slodze, kas pārsniedz 8 × 10 * 5 SV / ml. Slodzi, kas lielāka par 1 × 10 * 7 SV / ml, uzskata par ļoti augstu, bet neliela slodze ir mazāka par 4 × 10 * 5 SV / ml.

Vīrusu slodzes pakāpe norāda uz vīrusa virulenci (agresivitāti): jo lielāks ir tā daudzums asinīs, jo ātrāk var attīstīties aknu komplikācijas. Augsta vīrusa koncentrācija grūtnieces asinīs palielina varbūtību, ka tā iekļūst caur augļa placentāro barjeru auglim. Virēmija ietekmē arī ārstēšanas efektivitāti: ar mazu skaitu terapijas efektivitāte ir augstāka nekā augsta.

Lai pārliecinātos par C hepatīta PCR analīzes precizitāti, ir jādod priekšroka tikai tām laboratorijām, kas ir labi pierādītas. Cenu politika šajā gadījumā nedrīkst būt galvenā loma.

PCR pētījums par C hepatītu: veidi, indikācijas, transkripts

Vīrusu C hepatīts ir nopietna slimība, kas rodas ar aknu bojājumu. Astoņdesmit procentos pacientu tas kļūst hronisks. Vīruss vairojas aknu šūnās - hepatocītos - un izraisa to nāvi. Mirušos audus aizvieto saistaudu fokus, attīstās fibroze.

Izveidojoties fibrozei, aknas nespēj pildīt savas funkcijas, sākas aknu ciroze, kas ir tās komplikācijām bīstama: paaugstināts spiediens portāla vēnu sistēmā, asiņošana no kuņģa-zarnu trakta, traucēta asins koagulācija, garīgās izmaiņas, ko izraisa toksisku produktu smadzeņu kodolu bojājumi.

Slimības cēlonis ir vīrusa infekcija no Flaviviridae ģimenes, kas pieder pie RNS vīrusu veida. Tas nozīmē, ka ģenētiskais materiāls, ar kuru sintezē patogēna proteīnus, ir kodēts ribonukleīnskābes molekulā. Infekcija notiek caur asinīm, seksuāli un no grūtnieces uz augli. Diemžēl starp infekciju un antivielu rašanās sākumu - pietiekami daudz laika - no divām nedēļām līdz sešiem mēnešiem. Tas neļauj noteikt infekciju ar ELISA un sākt ārstēšanu agrīnā stadijā.

Kas ir PCR analīze?

PCR ir molekulārās analīzes metode, kas ļauj noteikt patogēna ģenētisko materiālu jau pirmajā nedēļā pēc inficēšanās ar polimerāzes ķēdes reakcijas palīdzību. Pētījumā ir augsts specifiskums, precizitāte un tas ļauj ne tikai noteikt vīrusa klātbūtni vai neesamību, bet arī tā koncentrāciju un genotipu.

Pētījumam tiek ņemta pacienta asinis, kurā var atrasties vīrusa RNS. Gruntus pievieno mākslīgi sintēzētiem asinīm vēlamā neliela garuma gēna, un RNS polimerāze ir īpašs enzīms, kas atkārtoti palielina patogēna ģenētiskā materiāla daudzumu. Izmantojot speciālu aparatūru, tiek veikti vairāki apkures un dzesēšanas cikli. Pēc tam materiāls tiek analizēts un salīdzināts ar zināmiem vīrusa gēniem, pamatojoties uz kuriem tiek izdarīts secinājums par infekcijas esamību vai neesamību.

C hepatīta PCR analīzes veidi

Ir trīs veidu PCR analīze:

PCR kvalitatīvā analīze. Pētījuma pirmais posms. Tas ļauj identificēt vīrusa ģenētisko materiālu asinīs.

PCR kvantitatīvā analīze. Ļauj noteikt vīrusa slodzi - patogēna ģenētiskā materiāla koncentrāciju vienā mililitrā asinīs. Šis pētījums tiek veikts pirms terapijas uzsākšanas, un pēc tam pirmajā, ceturtajā, divpadsmitajā un (ja kurss ir garš) divdesmit ceturtā ārstēšanas nedēļa, lai novērtētu tā efektivitāti.

Genotipēšana C hepatīta izraisītājs bieži un ātri mutē. Uz planētas tika atrasts septiņi šīs vīrusa genotipa varianti. Krievijā pirmais, otrais un trešais veids ir izplatīts. Katram no genotipiem ir atšķirīga rezistence pret terapiju, piemēram, pirmā veida ārstēšanas efektivitāte ir sešdesmit procenti, bet otrajā un trešajā gadījumā šis skaitlis sasniedz astoņdesmit piecus. Tāpēc, lai izvēlētos piemērotas zāles un noteiktu pietiekamu ilgumu ārstēšanas kursu, ir nepieciešams precīzi noteikt, kāda veida vīruss pacientam ir inficēts.

C hepatīta PCR analīzes indikācijas

PGR pētījums ir parakstīts šādos gadījumos:

• kontakts ar slimu personu, kurā var rasties infekcija;
• pozitīvs imūnanalīzes tests;
• aknu cirozes pazīmes: izmaiņas aknās, palielināta liesa, subkutānas vēnu plexus parādīšanās uz vēdera;
• aknu bojājumu simptomu parādīšanās: sāpes labajā vēderā, ādas dzeltēšana;
• paaugstināta ALAT un AST aktivitāte asins bioķīmiskajā analīzē;
• pirms ārstēšanas uzsākšanas, lai noteiktu vīrusu slodzi;
• uzraudzīt pretvīrusu terapijas efektivitāti;
• pēc ārstēšanas, lai kontrolētu recidīvu;
• diagnosticēta B hepatīta klātbūtnē, lai izslēgtu jauktu aknu bojājumu.

Pētījuma par C hepatītu izpēte

PCR analīzes un C hepatīta enzīmu imūnanalīzes dekodēšanu veic hepatologs vai infekcijas slimību speciālists. PCR rezultātu analīze ir nepieciešama kopā ar datiem par asins, biopsijas un ultraskaņas bioķīmisko analīzi. Tikai kvalificēts ārsts varēs analizēt pētījumu rezultātus un, pamatojoties uz tiem, noteikt pareizu ārstēšanu.

Kvalitatīvās analīzes dekodēšana.

Analizētajā bioloģiskajā materiālā konstatēts patogēna ģenētiskais materiāls. Infekcija apstiprināta.

Infekcija nav sastopama, vai patogēna RNS daudzums ir zem jutības robežas.

Kvantitatīvās analīzes dekodēšana.

Normāla likme veseliem cilvēkiem. Tas nozīmē, ka testa materiāls nesatur C hepatīta RNS vai tā koncentrācija ir zemāka par pētījuma jutības slieksni.

RNS koncentrācija ir zem kvantitatīvā diapazona. Šie rezultāti tiek interpretēti ļoti uzmanīgi, korelē tos ar citu pētījumu datiem, bieži vien atkārtoti pētot.

Vīrusu slodzes līmeni noteiktā koncentrācijā uzskata par zemu. Parasti vīrusa daudzuma samazināšanās nozīmē, ka terapija ir veiksmīga.

Vairāk nekā 8 * 10 ^ 5 SV / ml

Vīrusu slodzes līmeni noteiktā koncentrācijā uzskata par augstu.

Vairāk nekā 2,4 * 10 ^ 7 SV / ml

RNS daudzums ir lielāks par kvantifikācijas diapazona augšējo robežu. Ar šo rezultātu nav iespējams izdarīt secinājumus par vīrusu slodzes pakāpi. Parasti šādos gadījumos testu atkārto ar asins parauga atšķaidīšanu.

Genotipa dekodēšana.

Konstatēta specifiska genotipa RNS

Biomateriālā konstatēja noteiktu genotipu un apakštipa hepatīta C vīrusu. Rezultāts ir kodēts ar romiešu cipariem un latīņu burtiem, piemēram - 1a, 2b. Kopumā ir septiņi genotipi un sešdesmit septiņi apakštipi, bet Krievijā ir tikai trīs pirmie veidi.

Tika konstatēta C hepatīta vīrusa RNS

RNS tika atrasts Krievijas retā genotipa asinīs, ko nevar attiecināt uz pirmo, otro vai trešo tipu. Ir nepieciešami vairāki pētījumi.

Šis rezultāts norāda, ka pacients ir vesels vai ka patogēna RNS daudzums ir pārāk mazs.

Iespējams, ka C hepatīta PCR analīze ir negatīva, un ar fermentu saistītā imunosorbenta analīze atpazīst antivielas pret vīrusu. Tas nozīmē, ka pacientam bija akūta C hepatīta slimība un tas tika atgūts pats. Aptuveni divdesmit infekcijas gadījumi izraisa spontānu atveseļošanos, ja pacienta organismam ir pietiekama rezistence pret infekciju.

Lai gan PCR ir ļoti precīza, tā rezultāti var būt izkropļoti šādās situācijās:

• asinis tika transportētas uz laboratoriju nepiemērotos apstākļos, tika pārkāpta temperatūra;
• biomateriāla paraugs bija piesārņots;
• asinīs bija heparīna un citu antikoagulantu atliekas;
• Tika konstatēts, ka pētnieki ir inhibitori - vielas, kas palēnina vai aptur polimerāzes ķēdes reakciju.

PCR priekšrocības salīdzinājumā ar citām metodēm

Diagnoze agrīnā stadijā. PCR nosaka cēloņa ierosinātāja ģenētisko materiālu. Izmantojot imunofluorescences analīzi, var identificēt tikai imūnglobulīnus - vielas, ko organisms ražo, reaģējot uz infekciju. C hepatīta infekcijas gadījumā plaisa starp infekciju un imūnās atbildes reakcijas sākumu var būt vairākas nedēļas un mēneši, šobrīd ELISA būs neefektīva. PCR sniegs atbildi pirmajā nedēļā pēc infekcijas.

Neliela kļūdu iespējamība. Pētījuma materiālā nosaka ģenētiskā materiāla laukumu, kas raksturīgs tikai vienam patogēnu veidam. Tas novērš viltus rezultātus. Ja ir iespējamas ELISA kļūdas, jo to pašu antivielu veidu var izdalīt pret dažādiem vīrusiem - šādas antivielas sauc par krusteniskām antivielām.

Augsta jutība. PCR ļauj atklāt RNS izraisītāju pat minimālos daudzumos. Tas ļauj identificēt slēptās infekcijas.

Kā sagatavoties asins ziedošanai PCR pētījumiem

C hepatīta PCR analīzei tiek savākta venozā asinis. Parasti divas asins daļas tiek ņemtas no pacienta vēnas vienlaicīgi: pirmais tiek nosūtīts uz PCR un otrs - ar ELISA. Tas tiek darīts, lai precīzāk novērtētu, cik daudz pacienta ir inficēts ar vīrusu, un kā imunitāte cīnās pret to.

Parasti pacientam ir jāievēro šādi noteikumi:

• no rīta tiek ņemts asins tests;
• Intervālam starp pēdējo ēdienu un asins nodošanu jābūt astoņām līdz desmit stundām;
• divas vai trīs dienas pirms analīzes ir jāatsakās no ceptiem un taukainiem pārtikas produktiem un alkohola;
• divdesmit četras stundas pirms analīzes pacientam jāizvairās no fiziskas slodzes: necietiet svaru, neiet uz trenažieru zāli vai peldbaseinu.