Hepatīts ir nopietna slimība, kurai ir daudz iemeslu. Tās attīstības pamatā ir tiešs vai netiešs kaitējums aknām. Ņemot vērā tā nozīmi visam organismam, var tikai minēt, cik grūti ir patoloģija. Šajā rakstā sīkāk apskatīsim C hepatīta kursa un laboratorijas diagnozes iezīmes.
Slimības cēlonis ir vīrusu aģents, kas attiecas uz RNS saturošiem patogēniem. Tam ir atšķirīga iezīme - spēja mutēt, tas ir, mainīt tās struktūru. Šī iemesla dēļ infekcija izbēg no imūnsistēmas uzbrukuma un vairumā gadījumu izraisa hronisku aknu iekaisumu.
Ņemot vērā dažādu vīrusa apakštipu esamību, zāļu izvēlei jābūt balstītai uz genotipēšanas rezultātiem. Neskatoties uz ilgstošu slimības izpēti un HCV struktūras iezīmēm, vēl nav bijis iespējams izstrādāt konkrētu slimības vakcīnu.
Agrās diagnosticēšanas grūtības ir asimptomātisks hepatīta kurss, kā rezultātā persona cirozes stadijā apmeklē ārstu. Lai laikus noteiktu slimību, ir nepieciešama regulāra medicīniskā pārbaude. Tikai laboratoriski pārbaudot asinis ir iespējams noteikt HCV un novērst apkārtējo personu inficēšanos. Fakts ir tāds, ka infekcijas nesējs ilgu laiku nevar uzminēt patoloģiju un turpināt vīrusa pārraidīšanu veseliem cilvēkiem.
Pārraides veidi
Vairumā gadījumu vīruss izplatās asinīs, jo tas satur vislielāko patogēnu ierosinātāju koncentrāciju. Tādējādi infekcija tiek nosūtīta:
- ar hemodialīzi;
- ar inficētu adatu;
- kaujas procesā, kad āda ir ievainota, un rodas asins kontakts;
- ar asins pārliešanu (asins pārliešana).
Infekcijas varbūtība intimitātes laikā ir nenozīmīga, jo sperma un maksts izvadīšana satur nelielu daudzumu patogēnu. Infekcijas risks ir ievērojami palielināts, pārkāpjot dzimumorgānu gļotādas integritāti. Tas novērots ar agresīvu un anālo seksu.
Runājot par vertikālo pārraides veidu, tas tiek veikts darba procesā. Augļa grūtniecības periodā patogēns nevar iekļūt caur placentu uz embriju. Dabiskā bērna piedzimšanas gadījumā slimības ierosinātājs tiek pārnests uz bērnu, traumējot ādu, ja tiek novērota saskare ar mātes asinīm.
Pēc patogēna iekļūšanas veselīgā organismā sākas antivielu sintēze, kas ir aizsardzība pret infekciju un pieder imūnkonstrukcijām. Tās ir atrodamas personas sākotnējā pētījumā, izmantojot ELISA.
Lai apstiprinātu diagnozi, pacients tiek pakļauts polimerāzes ķēdes reakcijai. Tā ir patogēna ierosinātāja ģenētiskā materiāla analīze un vīrusu slodzes noteikšana.
C hepatīta laboratoriskā diagnostika
Laboratorijas diagnoze sākas ar fermentu imūnanalīzi. Tās galvenais uzdevums ir noteikt antivielas, kas ražotas pret patogēnu. Tās efektivitāte ir gandrīz 95%. Pateicoties šim pētījumam, ir iespējams identificēt vīrusa nesēju pirmsklīniskajā stadijā un nosūtīt to tālākai pārbaudei.
ELISA kvalitatīvā analīze liecina par imūnglobulīnu klātbūtni vai neesamību pacienta asinīs. Tā rezultāts var būt "pozitīvs" vai "negatīvs". Saņemot pirmo atbildi, persona tiek nosūtīta uz nākamo pārbaudi - PCR. Tās cena ir atkarīga no reaģentu un laboratorijas kvalitātes. Polimerāzes ķēdes reakcijas izmaksas var sasniegt 4000 rubļu.
PCR iezīmes
Izmantojot polimerāzes ķēdes reakciju, pat neliels bioloģiskā materiāla daudzums ļauj novērtēt vīrusa slodzi asinīs, ti, aprēķināt patogēnu koncentrāciju vienā mililitrā šķidruma.
Pateicoties PCR, hepatīta diagnoze ir kļuvusi daudz vieglāka. Analīze ļauj identificēt HCV RNS, noteikt infekcijas procesa stadiju un vīrusa nesēja infekcijas pakāpi.
Pastāv vairāki ģenētiskās diagnostikas veidi:
- C hepatīta PCR kvalitatīvā analīze apstiprina HCV klātbūtni vai neesamību subjekta asinīs:
- kvantitatīva, caur kuru var aprēķināt vīrusu koncentrāciju un noteikt slimības stadiju. Rezultāts tiek izteikts SV / ml vai kopijās / ml (atkarībā no laboratorijas);
- genotipu noteikšana - nepieciešama, lai noteiktu HCV genotipu. Tas ir nepieciešams, lai precīzi atlasītu zāles, kas šajā gadījumā būs visefektīvākās. Analīze netieši norāda uz patoloģiskā procesa smagumu aknās. Tādējādi trešajā patogēna genotipā visbiežāk tiek novērota steatoze, kuras pamatā ir tauku uzkrāšanās hepatocītos (to šūnās). Turklāt vīrusa veids ietekmē terapeitiskā kursa iznākumu un ilgumu.
C hepatīta PCR kvalitatīvā analīze
Pirmkārt, laboratorijā pārbauda bioloģisko materiālu HCV RNS klātbūtnei. Ir svarīgi atcerēties, ka C hepatīta kvalitatīvai analīzei ir zināma jutīguma pakāpe, un tāpēc ne vienmēr var sniegt pareizo atbildi. Šajā gadījumā ieteicams atkārtoti veikt laboratorijas diagnostiku, izmantojot citus reaģentus.
Lai iegūtu ticamus rezultātus, jāizmanto testa sistēmas, kuru jutība ir vismaz 50 SV / ml.
Diagnostikas rezultāts var būt „pozitīvs” vai “negatīvs”. Ja patogēns nav atrodams asinīs, pētījums ir pabeigts. Ja paraugā tiek atklāts patogēns aģents, tad kvantitatīvi nosaka vīrusu slodzi.
Ja tiek pārkāpts process, tiek iegūta viltus negatīva atbilde, piemēram, aktīvajā komponentā, kas nomāc patogēna kopiju veidošanu, nonāk vidē. Tādējādi nav iespējams parādīt patiesu asins attēlu, tāpēc personas infekcija nav diagnosticēta.
Ja bioloģiskā materiāla savākšanas caurule, kā arī pētījuma vide ir piesārņota, var iegūt viltus pozitīvu rezultātu. Turklāt šāda analīzes reakcija ir iespējama, ja ir jauktas infekcijas, kad aknām ir vairāki vīrusi, piemēram, C un D hepatīts.
Kvalitatīvās izpētes indikācijas
Ārsts var izrakstīt pacientam kvalitatīvu pētījumu par C hepatīta vīrusa RNS identifikāciju:
- saņemot pozitīvu vai apšaubāmu fermenta imūnanalīzes reakciju;
- diagnozes pārbaudei;
- noteikt vīrusu slodzi;
- noteikt slimības stadiju;
- jauktās infekcijas diagnozi. C hepatīts bieži inficē aknas vienlaikus ar “D” vīrusu;
- terapeitiskās taktikas noteikšana, ņemot vērā izraisītāja genotipu;
- novērtējot izmaiņu dinamiku ārstēšanas laikā ar pretvīrusu zālēm.
Polimerāzes ķēdes reakcijas priekšrocības ir:
- augsta tehnika, kas ļauj noteikt infekcijas faktu pirmsklīniskajā stadijā;
- patogēna ģenētiskā materiāla identifikācija, nevis tās antivielas;
- iespēja izveidot patogēna ierosinātāja apakštipu;
- augsts diagnostikas ātrums, jo nav nepieciešama materiāla sēšana uz barotnes, un ir pietiekami izmantot īpašas testēšanas sistēmas. Persona saņem rezultātu pēc 5 stundām;
- daudzpusība. Analīze ļauj identificēt jebkuru ģenētisko materiālu (RNS, DNS). Pateicoties tam, ārsts var apstiprināt C hepatītu un citus slimības veidus (B);
- spēja atklāt latentu infekciju.
Kvantitatīvie pētījumi
Pētot asinis, izmantojot polimerāzes ķēdes reakciju, var aprēķināt patogēnu skaitu noteiktā bioloģiskā materiāla apjomā. Indikators ir izteikts SV / ml. Analīzes rezultātā ir iespējams noteikt pacienta inficēšanās pakāpi, noteikt infekcijas procesa stadiju un novērtēt arī zāļu terapijas efektivitāti.
Pamatojoties uz PCR, speciālists izlemj, kuras zāļu devas var bloķēt patogēnu reprodukciju. Turklāt tiek noteikts pretvīrusu terapijas ilgums un dzīves prognoze. Ir svarīgi atcerēties, ka testa sistēmām ir augsta jutība, tāpēc metode ļauj apstiprināt personas infekciju pirmsklīniskajā stadijā.
Genotipēšana
Ņemot vērā patogēna spēju mutēt, tās genotips ir nepieciešams, lai noteiktu ārstēšanas taktiku un pretvīrusu zāļu izvēli. Piemēram, HCV 1 ārstēšana ilgst 48 nedēļas, pozitīva tendence vērojama tikai 60% gadījumu. 2. un 3. genotipam ir labvēlīgāka prognoze. Pretvīrusu zāles ir parakstītas uz 8 mēnešiem, un to efektivitāte sasniedz 85%.
Saskaņā ar statistiku vairumā gadījumu HCV 1, 2 un 3 ir reģistrēti Krievijas Federācijā.
Atšifrējot laboratorijas testu, šo atbildi var norādīt - “nav ierakstīts”. Tas nozīmē, ka vīruss cirkulē pacienta asinsrites sistēmā un ka testēšanas sistēma to nevar atpazīt. Šajā gadījumā analīzes rezultāts norāda, ka patogēns nav raksturīgs konkrētam ģeogrāfiskajam apgabalam.
Kā iegūt ticamus rezultātus?
Lai iegūtu kvalitatīvu PCR pētījumu, lai atklātu C hepatīta izraisītāja RNS, ir pareizi rezultāti, ir jāievēro prasības laboratorijas diagnostikai:
- asins paraugu ņemšana notiek tukšā dūšā, un "izsalcis" plaisa nedrīkst būt īsāka par 8 stundām;
- divas dienas pirms pētījuma veikšanas ieteicams pārtraukt alkohola lietošanu un atteikties no pikantiem, taukainiem un kūpinātajiem ēdieniem;
- atcelt tādu zāļu ieviešanu, kas samazina asins recēšanu, piemēram, heparīnu. Ja šīs zāles ir paredzētas veselības apsvērumu dēļ, Jums par to jāinformē ārsts. Turklāt speciālistam jāapzinās citu zāļu, kas var ietekmēt laboratorijas pētījumu rezultātus, uzņemšana;
- Bioloģiskā materiāla savākšanas priekšvakarā nedrīkst veikt fizioterapeitiskās procedūras, un tās ir pakļautas smagai fiziskai slodzei.
Analīzes rezultātus var ietekmēt ne tikai persona, kas ziedo asinis, bet arī citi faktori, proti:
- sliktas kvalitātes asins paraugu ņemšana;
- ieteikumu par bioloģisko materiālu transportēšanu neievērošana;
- nepietiekama laboratorijas darbinieku apmācība;
- neatbilstība pētniecības metodei;
- antikoagulantu (heparīna) ievadīšana asins paraugu ņemšanas priekšvakarā. Šī zāļu grupa samazina recēšanu, tādējādi palēninot reaģentu darbu.
Dažādās laboratorijās diagnostikas reakcija var nedaudz atšķirties, taču šīs kļūdas neietekmē pētījuma galīgo rezultātu.
Īpaša uzmanība tiek pievērsta laboratorijas izmantotajām testēšanas sistēmām. Bieži priekšroka tiek dota reaģentiem ar augstu jutību. Tas ir svarīgi pacientiem ar zemu vīrusu slodzi, jo to ir grūti noteikt.
Cik bieži tiek veikts laboratorijas tests?
Primārā polimerāzes ķēdes reakcija tiek veikta cilvēkiem, kuri ir atklāti ar imūnanalīzi hepatīta patogēna antivielām. Šādā gadījumā tas ir piešķirts, lai apstiprinātu personas infekcijas faktu un noteiktu slimības stadiju. Turklāt analīze ļauj noteikt vīrusa apakštipu, kas ir īpaši svarīga narkotiku izvēlei.
Nākamais obligāto laboratorisko pārbaužu periods ir 3 mēneši no pretvīrusu terapijas sākuma. Diagnostika ļauj novērtēt zāļu efektivitāti, pielāgot devu vai aizstāt tās.
Papildus pamata testiem PCR var veikt papildus 4 un 24 nedēļas pēc ārstēšanas sākuma. Pozitīvu slimības prognozi apstiprina vīrusu slodzes samazināšanās pēc trim ārstēšanas mēnešiem. Piemēram, tam vajadzētu samazināties no 1 miljona SV / ml līdz vairākiem simtiem tūkstošu.
Ja patogēno vielu koncentrācija asinīs saglabājas tādā pašā līmenī vai nedaudz palielinās, tas liecina par pretvīrusu līdzekļu neefektivitāti un prasa to aizstāšanu. Lietojot PCR terapijas beigās, ir iespējams apstiprināt pacienta atveseļošanos.
Lai pareizi interpretētu laboratorijas diagnostikas rezultātus, ir nepieciešama konsultācija ar hepatologu vai infekcijas slimību speciālistu. Ņemot vērā to, ka ELISA testos ir kļūdainas atbildes, bieži izmanto analīzi tikai primārajai pārbaudei. Lai rūpīgāk izpētītu pacientu, kurš lietoja polimerāzes ķēdes reakciju.
C hepatīta vīrusa PCR analīze
C hepatīts ir nopietna aknu slimība jebkurai personai. Patoloģiju izraisa flavivīruss HCV, kura struktūrā ir klāt RNS molekula, kurā ir vīrusa vispārējais ģenētiskais kods.
Patoloģija var būt dažāda veida, viss tieši atkarīgs no personas vispārējā stāvokļa un katra atsevišķa organisma īpašībām.
Šī struktūra ļauj analizēt PCR, lai noteiktu C hepatīta kategorijas vīrusa klātbūtni organismā.
Tas ļauj laicīgi identificēt vīrusu, kas ir bīstams cilvēkiem, iziet narkotiku ārstēšanas kursu un atjaunot veselību, aizsargājot organismu no aknu iznīcināšanas.
HCV vīruss var izpausties gan akūtā, gan bīstamā veidā un hroniski. Ja cilvēks vienā vai citā laikā ir atklājis šo vīrusu, tam jāpiešķir PCR analīze.
Kāpēc tiek veikta PCR analīze?
Pamatojoties uz analīzes rezultātiem, ārsts varēs sagatavot ārstēšanas shēmu.
C hepatīta PCR laboratoriskā medicīniskā analīze ir pētījums par bioloģisko materiālu, kas ņemts, lai noteiktu flavavīrusu. Pētījums apzīmē polimerāzes ķēdes reakciju.
Tas parāda vīrusa bojājuma kopējo kvantitatīvo vērtību, tā kvalitatīvās īpašības, kā arī ir iespējams noteikt RNS saturošā vīrusa genotipu.
Tas ir svarīgi! Pamatojoties uz šo analīzi, ārsts nosaka metodi, terapijas veidu un ilgumu. Turklāt, veicot analīzi, ir iespējams noteikt vispārējo epidemioloģisko faktoru, tas ir, slimības pārnešanas risku citiem pārvadātājiem.
Mūsdienu medicīnas analīzi sauc arī par RNS analīzi. Iemesls tam ir C hepatīta flavavīruss, ko veido RNS daļiņa, kuras lielums ir aptuveni 30-60 nm. Viens no šīs vīrusa raksturīgajiem raksturlielumiem ir noteikta tendence uz mutāciju.
Katrai klātbūtnei vai genotipam piemīt dažādas pretestības. Šis apstāklis kļūst par pamatu dažādām slimības izpētes un ārstēšanas metodēm, kā arī turpmāka prognoze ar labi vadītu terapiju.
Kā to darīt
Analīzi veic stingri tukšā dūšā, ti, pirms brokastīm tiek dota venozā asinis. Testēšanas metode tiek veikta, izmantojot Real-Time PCR vai ļoti jutīgu, izmantojot mūsdienu standartu diagnostiku, kas tiek veikta reālā laikā.
Apakšējā noteikšanas robeža šajā gadījumā ir 15 SV / ml. Analīze tiek veikta, izmantojot slēgtas automatizētas sistēmas. C hepatītu var noteikt, izmantojot tādus testus kā COBAS AMPLICOR ar kopējo jutības līmeni 50-100 SV / ml.
Tas ir svarīgi! Visu veidu līdzīgi mūsdienu laboratorijas pētījumi tiek veikti, ņemot vērā noteiktu jutības slieksni.
Mēs runājam par reaģenta spēju noteikt reaģenta minimālo spēju noteikt vīrusu pētāmā bioloģiskajā materiālā. Ja organismā nav slimības, pētījuma rezultāts izskatīsies kā “nav atrasts”.
Attēlā parādīta PCR analīzes shēma:
PCR analīzes veidi un to rezultāti
Ja jums ir sīkākās slimības un sāpes sīkdatņu jomā, nekavējoties jākonsultējas ar ārstu, kurš veiks rūpīgu pētījumu. C hepatīta PCR analīze balstās uz trim galvenajiem punktiem:
- Kvantitatīvā analīze.
- Kvalitatīvā analīze.
- Genotipēšana
Veiktie testi sniedz iespēju noteikt un noteikt precīzu virēmijas raksturu un dažādus ģenētiskā plāna simptomus, kas saistīti ar patogēna klātbūtni. Tieši proporcionāli jutīgumam no veiktās diagnostikas sistēmas medicīnisko izpēti var veikt vienu reizi, kā arī dažus apstiprinājumus.
Tas jādara, lai precizētu iepriekš iegūtos rezultātus, un šajā gadījumā to izmanto jutīgāks reaģents.
Augstas kvalitātes PCR
PCR kvalitatīva analīze ir vēl viens nosaukums pētījumam, piemēram, polimerāzes ķēdes reakcijai. Ar testa standarta jutību, kas ļauj noteikt vīrusa mikrobu klātbūtni, indikatori būs robežās no 10-500 SV / ml.
Ar negatīvu slimības analīzi analīze parādīs, ka kopējā koncentrācijas pakāpe pacienta asinīs būs mazāka par vispārējo jutības slieksni diagnostikas sistēmai.
Ja kvalitatīvā PCR laikā tika iegūta „neatklāta” atbildes reakcija, turpmākai ārstēšanai jums būs jāzina reaģenta kopējā jutības slieksnis. Attiecībā uz pozitīvo reakciju PCR analīzes laikā to var iegūt jau 4. dienā pēc infekcijas. Standarta proteīna frakcijas līdz konstatētajiem flavavīrusiem var parādīties daudz vēlāk.
Vispārējo PCR analīzes shēmu var attēlot šādi:
Kvantitatīvais PCR
Kvantitatīvais PCR ir īpašs iegūto vīrusu slodzes rādītājs, kas atspoguļo vīrusa RNS koncentrācijas kopējo līmeni cilvēka organismā. Šis indikators parāda vīrusu RNS enzīmu daudzumu, kas atrodas uz kubikcentimetru, kas ņemts no asins vēnas.
Šī pētījuma rezultāti medicīniskās izpētes sistēmā apzīmēti ar vienu mililitru vienībām. Uz sertifikātiem, kas izsniegti rokās, šis rādītājs var izskatīties kā 1,7 miljoni vai 1,700 000 SV / ml.
Kvantitatīvā PCR analīze tiek piešķirta šiem pacientiem pirms pretvīrusu terapijas veikšanas. Otro reizi notiek 12. ārstēšanas nedēļā, kas ļauj pareizi novērtēt C hepatīta terapijas rezultātus. Citiem vārdiem sakot, analīze ļauj noteikt tādus svarīgus parametrus kā:
- Tiek noteikts inficētspējas līmenis, tas ir, mikrobu pārraides riska pakāpe no inficētās personas uz veselīgu cilvēku. Jo augstāka ir flavavīrusa RNS koncentrācija, jo lielāka ir citas personas infekcijas varbūtība, kas ir svarīga seksuālajās attiecībās.
- Kopējais efektivitātes līmenis un izvēlētā ārstēšanas metode.
- Tā ir ideāla iespēja noteikt pretvīrusu terapijas ilgumu un prognozi. Kā likums, jo lielāks slodze, jo ilgāk ārstēšana ilgs.
Ir vērts zināt, ka kvantitatīvā PCR ir atkarīga no konkrētā laboratorijas testa veida un jutīguma sliekšņa. Noteiktā standarta zemākā robeža ir rādītājs, kas nesasniedz 600 000 SV / ml.
Vidējais ir robežās no 600 000 līdz 700 000 SV / ml. Ja rezultāti tika iegūti virs 800 000 SV / ml, ārsts nekavējoties nosaka augstu vielas koncentrācijas līmeni, piemēram, RNS ar sastāvā esošo vīrusu.
Tas ir svarīgi! Tieša saikne starp HCV RNS līmeni un slimības smagumu liecina, ka šis vīruss atrodas vispārējā asins sastāvā, kā arī norāda uz patoloģijas sarežģītību. Pacientam var būt pietiekami augsta vīrusu slodze. Turklāt šī saikne norāda, ka šūnām ir diezgan nopietni bojājumi.
Genotipēšana
Sakarā ar relatīvi augsto HCV mutācijas aktivitāti dabā, veicot testēšanu, ir iespējams noteikt, kā vīrusa veids ir slims personas asinīs. Mūsdienu medicīnā ir zināmi 11 vīrusa genotipi, piemēram, C hepatīts, kas ietver diezgan lielu skaitu dažādu pasugas vai apakštipu.
1,2 un 3 veidi Krievijā ir pazīstami un bieži sastopami, kopumā genotipēšana ir ļoti svarīgs veiktās analīzes elements. Ar to ārsts saprot patoloģijas rezistences līmeni vai pretestību izvēlētajām zālēm.
Gandrīz vienmēr, pamatojoties uz šo analīzi, tiek veidota turpmākā ārstēšana. Tas ir svarīgi, jo pastāv tādi ārstēšanas noteikumi kā:
C hepatīta kvalitatīvā analīze
2017. gada 8. marts, 12:29 Ekspertu raksti: Nova Vladislavovna Izvčikova 0 10 547
Polimerāzes ķēdes reakcijas kvalitatīvā analīze - C hepatīta PCR nosaka HCV klātbūtni vai neesamību organismā. Laboratorijas apstākļos tiek pētīta RNS struktūra, kas ietver vīrusu. Vīrusa C atklāšanas gadījumā nepieciešams veikt ārstēšanas kursu, jo novārtā atstātās aknu stāvoklis radīs smagas sekas. Pēc reģenerācijas tiek veikta augstas kvalitātes PCR, lai apstiprinātu antivielu neesamību. Iecelts un regulāri pārbauda. Tā kā asinsķermenīšu koncentrācija asinīs ir zema, PCR (kvalitatīvs) neko nevar atklāt, jo diagnostikas sistēmai ir savi jutīguma sliekšņi. Sākotnējā slimības stadijā vai vieglā formā PCR veic ultradiagnostika ultra-jutīgās iekārtās.
Kas ir RNS vīruss?
C hepatīta vīrusa (vai C hepatīta vīrusa RNS) termins RNS ir pati aknu slimība. Vīruss C saistās ar veselīgu ķermeņa šūnu, iekļūstot tajā. Laika gaitā, izplatoties visā ķermenī, ir nepieciešams tikai nokļūt asinīs. Rezultātā patogēns iekļūst aknās, drošina savas šūnas un darbojas smagi. Aknu šūnas (hepatocīti) darbojas tās ietekmē, mainās, un no tā viņi mirst. Jo ilgāk vīruss C ir aknās, jo lielāks ir šūnu skaits. Laika gaitā attīstās bīstamas slimības, kas izraisa ļaundabīgu deģenerāciju un nāvi.
Aknu infekcija ar šāda veida vīrusu var izpausties ārēji. Daudzus gadus vai gadu desmitus inficētā persona jūtas pilnīgi veselīga, un tikai nejauša pārbaude visbiežāk atklāj patoloģiju. Ziedojot asinis hepatīta gadījumā, tiek pārbaudīta daļa no RNS (ribonukleīnskābes) ķēdes, kas ir daļa no cilvēka gēna (DNS). Laboratorijas testu rezultātus nevajadzētu izmantot pašapstrādei, jo tas ir tikai indikators. Precīzu attēlu un turpmāko diagnozi labāk nosaka ārsts.
Kad tas ir izdarīts: pētījuma indikācijas
Apstiprinot HCV, tiek veikta PCR analīze (polimerāzes ķēdes reakcija). PĶR pētījumi palīdz atrast RNS struktūras izraisītāju un izrakstīt efektīvu terapiju. Iecelts šādos gadījumos:
- aknu iekaisuma pazīmju noteikšana;
- skrīninga pētījumi profilaksei;
- kontaktu pārbaude;
- jauktas izcelsmes hepatīta diagnoze (galvenā patogēna noteikšana);
- noteikt vīrusa reproduktīvās aktivitātes līmeni hroniskā formā;
- aknu ciroze;
- noteikt noteiktās ārstēšanas efektivitāti.
Ir kvalitatīva un kvantitatīva PCR analīze. Kvantitatīvais PCR parāda RNS procentuālo daudzumu ar vīrusa nesējiem asinīs, un kvalitatīvs norāda uz vīrusu klātbūtni vai neesamību. Pozitīvam kvalitātes rādītājam (C hepatīta RNS klātbūtnei) ir vajadzīgs arī kvantitatīvs pētījums. C hepatīta izraisītāja augsts koncentrācijas līmenis ir saistīts ar tā pārnešanas risku, tas ir, citu infekciju. Zemie numuri ir labāk ārstējami. RNS vīrusu daudzums asinīs nav saistīts ar slimības intensitāti. PCR analīze tiek veikta arī interferona terapijas gadījumā, lai noteiktu ārstēšanas kursa ilgumu un sarežģītību.
C hepatīta augstas kvalitātes PCR analīzes iezīmes
Kvalitatīvai analīzei ir piešķirts polimerāzes ķēdes reakcijas indikators visiem pacientiem, kuriem ir asins C hepatīta antivielas. Ieteicams veikt hepatīta B analīzi, tad pozitīva secinājuma gadījumā un par hepatītu D. Arī kvalitatīvi analizēta reakcija jāveic kopā ar citām asins analīzēm. Analīzēs tiks parādīts pilnīgs vīrusu izplatīšanās attēls.
No testa rezultātiem ir redzams vai negatīvs tikai pozitīvs C hepatīta tests, tas ir, vīrusa klātbūtne vai neesamība. Ja izeja ir "atklāta", tad vīruss ir un joprojām ir aktīvs. Apzīmējums "nav atklāts" norāda uz vīrusa trūkumu vai tā nelielo daudzumu. Ar šo rādītāju jāatceras, ka diagnostisko sistēmu analītiskā jutība ir atšķirīga un ka RNS hepatīts C joprojām var būt asinīs, bet tas nav izpaužas analīzē.
Īpaši jutīga PCR metode atklāj ļoti hepatītu C pat nelielos daudzumos. Tiek izmantots fluorescences hibridizācijas pētījums, kas ir daudzkārt lielāks nekā standarta PCR sistēmas. Šo metodi izmanto vairākos gadījumos:
- iespējamas C hepatīta slēptās formas;
- PCR diagnostika neapstiprināja patogēnu, bet ir antivielas;
- atgūšanas gadījumā;
- lai atklātu agrīnu infekciju.
Dekodēšanas analīze
HCV PCR dekodēšana ietekmē galīgo lēmumu, veicot diagnozi, jo īpaši ar ultrametodu. Šā pētījuma galvenais trūkums ir stingri ievērot parauga un materiālu sterilos apstākļus. Neliela novirze dažkārt rāda neprecīzus analītiskus secinājumus, sarežģī diagnozi un turpmāku ārstēšanu. PCR analīze hepatīta RNS noteikšanai ne vienmēr pārliecinoši parāda slimības attēlu, dažreiz ir pieļautas neprecizitātes un abos virzienos.
Diagnozējot hepatīta vīrusu, ieteicams izmantot visaptverošu pārbaudi.
Rādītāju norma
Analizējot polimerāzes ķēdes reakciju, pētījuma rezultātos JgM antivielu trūkums pret C hepatītu ir uzskatāms par normu. Vienlaikus seroloģiskās analīzes rezultāti liecina par C vīrusa antivielu klātbūtni, un tas ir arī normālā diapazonā. Kvalitatīvā definīcija neliecina par slimības intensitāti, tā atklāj tikai C hepatīta izraisītāju RNS. Šo analīzi atkārto pēc apstrādes, lai apstiprinātu faktisko reģenerāciju.
Novirzes
Ja ir klāt JGM antivielas pret HCV RNS, tas norāda uz attīstības infekciju. Vienlaikus slimība notiek akūti vai hroniski, kas izpaužas dažādos posmos. Ja tiek reģistrēta antivielu skaita samazināšanās, analīze liecinās, ka ārstēšanas rezultāti tika sasniegti atveseļošanās laikā. Diagnostikā ir ļoti reti viltus pozitīvi konstatējumi. Tās ir sastopamas sievietēm grūtniecības laikā un cilvēkiem ar citām infekcijas slimībām.
C hepatīta PCR analīze
Lai diagnosticētu "hronisku C hepatītu (CVHS)", nepieciešama visaptveroša personas pārbaude, kas ietver klīniskos, laboratorijas un instrumentālos pētījumus. No diagnozes viedokļa svarīga ir pareiza diagnoze ir PCR metode - polimerāzes ķēdes reakcija.
Ko parāda šī analīze un kāpēc tas ir nepieciešams?
Šī laboratorijas metode nosaka C hepatīta vīrusa RNS cilvēka asinīs. Kopā ar imūnsistēmu, kas saistīta ar fermentu, ELISA, lai noteiktu vīrusa antivielas, PCR izmanto, lai diagnosticētu CVHC un tā patogēnu genotipu. Šis pētījums ir viena no jaunākajām laboratorijas diagnostikas metodēm. Tās uzticamība CVHS pārsniedz 97%, kas tiek uzskatīts par ļoti labu pētījumu rādītāju.
CVHS ir trīs PCR asins analīzes: kvalitatīva, kvantitatīva un vīrusa genotipēšana. Pirmais vīrusa pētījums (kvalitatīvā analīze) to atklāj asinīs, tāpēc to izmanto tikai diagnosticēšanai.
Otrais (kvantitatīvais) pētījums nosaka vīrusa slodzes pakāpi organismā, tāpēc to izmanto, lai uzraudzītu terapijas efektivitāti.
Trešais PCR (genotipa noteikšana) precizē diagnozi, nosakot vīrusa genotipu, kas ir ļoti svarīgs pareizas pretvīrusu ārstēšanas iecelšanai.
Polimerāzes ķēdes reakcijas metodes būtība ir tādu fermentu izmantošana, kas vairo patogēna ģenētisko materiālu biomateriālā. Šādas replikācijas procesā cauruli ar asinīm vairākas reizes karsē un atdzesē līdz temperatūrai, kas nepieciešama, lai paātrinātu enzīmu reakciju. Šo manipulāciju rezultātā vīrusa genoma daudzums palielinās daudzas reizes, ļaujot to konstatēt pat ar minimālu daudzumu.
PCR diagnostikai ir daudz priekšrocību salīdzinājumā ar citiem laboratorijas testiem:
- augsta jutība - 97-98%;
- garantēta analītiskā specifika (atklāj tieši to patogēnu, kuru vēlaties atrast, nevis tā saistīto celmu);
- veikšanas ātrums (secinājumu iegūšanai nepieciešams ne vairāk kā 2 dienas).
Triju veidu PCR testi
Visiem pacientiem, kuriem ELISA analīze atklāja HVGS vīrusa antivielas, tiek piešķirta augstas kvalitātes PCR analīze. Pēc augstas kvalitātes PCR veikšanas var iegūt divas atbildes iespējas: "tiek konstatēta" RNS "vai" RNS nav konstatēta. " Lai noteiktu minimālo vīrusa daudzumu asinīs, ir vajadzīgas testēšanas sistēmas, kuru jutība ir vismaz 50 SV / ml. Ja vīrusa koncentrācija pacienta asinīs ir mazāka nekā diagnosticum var noteikt, pētījuma rezultāts var būt kļūdains. Lai izvairītos no šādas diagnostikas kļūdas, laboratorijām, kas veic PCR diagnostiku, jānodrošina ļoti jutīgas testēšanas sistēmas. Laboratorijā "Invitro", piemēram, tiek izmantoti testi, kuru jutība ir 15 SV / ml. Laboratorijas darbiniekiem ir pienākums sniegt informāciju par testu jutīgumu pacientiem un ārstiem pēc pirmā pieprasījuma.
PCR kvantitatīvā analīze nosaka virēmijas pakāpi, ti, patogēna koncentrāciju asinīs, vīrusu slodzi. Šī pētījuma rezultāts, atšķirībā no augstas kvalitātes PCR, ir izteikts skaitļos, piemēram, 2 × 10 * 6 SV / ml, kas nozīmē 2 miljonus starptautisko vienību 1 ml asinīs. Dažas laboratorijas izmanto citu rādītāju - kopiju skaitu / ml. Šie divi rādītāji ir viegli konvertējami: 1 starptautiska vienība ir 4 RNS kopijas. Tādējādi 2 × 10 * 6 SV / ml nozīmē, ka 8 × 10 * 6 vīrusu RNS kopijas 1 ml, t.i. 8 miljoni kopiju 1 ml asins.
Genotipēšana ir viena no sešiem vīrusa genotipiem. Klīniskais attēls, aknu komplikāciju attīstības ātrums un prognoze pacienta turpmākajai dzīvei ir atkarīga no ierosinātāja genotipa. Vīrusa genotips ir ļoti svarīgs jau diagnozes stadijā, jo zāļu kombinācija un pacientam piešķiramā terapeitiskā kursa ilgums ir atkarīgs no tā pareizas noteikšanas.
Tomēr pat šim šķietami „ideālajam” laboratorijas pētījumam ir savi trūkumi:
- pētījums atkārto visu patogēnu, pat nedzīvo, ģenētisko materiālu, kas var izkropļot rezultātu. Tādēļ, lai uzraudzītu efektivitāti ar PCR palīdzību, atkārtota analīze tiek veikta ne agrāk kā 2 mēnešus pēc iepriekšējās analīzes, lai mirušie vīrusi varētu atstāt pacienta organismu;
- daļa no vīrusa genoma, ko nosaka, izmantojot testēšanas sistēmas, teorētiski var būt citos vīrusos vai mikroorganismos, tāpēc pastāv viltus pozitīva reakcija;
- vīrusi ātri mainās. Dažreiz vīrusa mutācijas ātrums un apjoms ir tik liels, ka testa sistēma pārtrauc savu genoma nozveju. Tā rezultātā ir iespējams kļūdains negatīvs rezultāts.
Lai novērstu šos trūkumus, laboratorijas testēšanas sistēmu ražotāji PCR diagnostikai pastāvīgi veic testus, tostarp savstarpējas reakcijas un jutīgumu pret konkrētu vīrusa genotipu.
Kā lietot C hepatīta PCR testu?
Lai PCR pārbaudes noslēgšana būtu ticama, ir stingri jāievēro noteikumi, lai sagatavotos tam:
- pētījums tiek veikts tukšā dūšā (glikoze, tauki, minerāli, kas nokļūst asinīs no pārtikas, var ietekmēt fermenta reakcijas ātrumu un kvalitāti);
- starpība starp pēdējo ēdienu un asins paraugu ņemšanu analīzei ir jābūt vismaz 8 stundām;
- pētījuma priekšvakarā ir aizliegts lietot alkoholu un patērēt taukainus pārtikas produktus, kuru likvidēšanas periods ir ilgstošs;
- dienā pirms došanās uz laboratoriju jāizvairās no spēcīga fiziska un emocionāla stresa;
- līdz asins paraugu ņemšanas laikam nav ieteicams smēķēt.
Lai izvairītos no nepareizu secinājumu parādīšanās, apgalvotajam pacientam laboratorijā ir jādodas nedaudz agrāk, nekā tiks ņemts asinis. Tas aizņem 15-20 minūtes, lai cilvēks noķertu elpu, nomierinātu. Adrenalīns, kas asinīs atrodas pēc ātras pastaigas, var ietekmēt izmeklēšanas rezultātu.
Ja pacientam, kuram tiek veikta analīze, jāveic jebkādas zāles, par to viņam jāinformē ārsts. Iespējams, ka daži no tiem kādu laiku būs jāatsaka (ja iespējams).
C hepatīta PCR analīzes rezultāts
Analīzes veikušās laboratorijas laboratorijas ārsta dekodēšana. Dekodēšana ir no normas iegūto rezultātu novirzes noteikšana. Rādītāju rādītāju nosaka tieši testēšanas sistēmas ražotājs, ko laboratorija izmanto diagnostikai. Tādēļ nav pārsteidzoši, ka dažās laboratorijās vīrusa slodzi nosaka SV / ml, bet citās - kopijās / ml.
Pēc secinājuma saņemšanas ir nepieciešams, lai to varētu pareizi interpretēt. Pētījuma rezultātu apstrādi veic ārstējošais ārsts no C hepatīta. Tikai pēc objektīvas, instrumentālas un laboratoriskas pacienta pārbaudes, ārsts var iegūt pietiekamu datu daudzumu, lai pareizi interpretētu iegūtos PCR rezultātus.
Kvalitatīvās analīzes novērtēšana parasti nerada grūtības pat pacientiem. Rezultāts var būt tikai viens: "atklāts" vai "nav atklāts". Šajā gadījumā otrā no tām ir norma.
Kvantitatīvās analīzes rādītājus ir grūtāk interpretēt. Tas parāda pacienta vīrusu slodzes pakāpi. Pat hepatologu vidū nav vienprātības par to, kā ārstēt atklāto virēmiju. Lielākā daļa ārstu sliecas uzskatīt, ka jāapsver liela slodze, kas pārsniedz 8 × 10 * 5 SV / ml. Slodzi, kas lielāka par 1 × 10 * 7 SV / ml, uzskata par ļoti augstu, bet neliela slodze ir mazāka par 4 × 10 * 5 SV / ml.
Vīrusu slodzes pakāpe norāda uz vīrusa virulenci (agresivitāti): jo lielāks ir tā daudzums asinīs, jo ātrāk var attīstīties aknu komplikācijas. Augsta vīrusa koncentrācija grūtnieces asinīs palielina varbūtību, ka tā iekļūst caur augļa placentāro barjeru auglim. Virēmija ietekmē arī ārstēšanas efektivitāti: ar mazu skaitu terapijas efektivitāte ir augstāka nekā augsta.
Lai pārliecinātos par C hepatīta PCR analīzes precizitāti, ir jādod priekšroka tikai tām laboratorijām, kas ir labi pierādītas. Cenu politika šajā gadījumā nedrīkst būt galvenā loma.
PCR diagnostikas izmantošana
Polimerāzes ķēdes reakcija (PCR) molekulārajā bioloģijā ir eksperimentāla metode vīrusu noteikšanai. Tas ļauj būtiski palielināt noteiktu nukleīnskābes fragmentu (DNS) koncentrāciju bioloģiskā materiāla paraugos, kas ļauj noteikt un atzīt tos.
Analīze tiek veikta šādi. Caurulē tiek ievadīts ģenētiskais materiāls (asins paraugs), kas var saturēt vēlamo gēnu. Ir izvietoti arī primeri - ķīmiski sintezēti segmenti ar nelielu garuma garu.
Uz trauka pievieno arī DNS vai RNS polimerāzi, kas spēj savienot nukleīnskābes ķēdi, kas ir pilnīgi identiska oriģinālam. Iegūtais sastāvs tiek ievadīts un četru brīvo nukleotīdu kopums - īpašs būvmateriāls RNS vai DNS, no kuriem viens satur radioaktīvās fosfora daļiņas.
Iegūtais maisījums tiek uzsildīts līdz 95–96 ° C, tāpēc tiek austi divi DNS spriegumi, kas parasti ir savstarpēji saistīti. Tad medikaments tiek atdzesēts, un tad paši primeri paši pievienojas vīrusa genoma vēlamajam reģionam, novēršot RNS (vai DNS) atkārtotu dubultā spirāles veidošanos.
Dzesēšanas procesā polimerāze meklē brīvu nukleotīdu ķēdi. Šā fermenta darbībai ir nepieciešama viena nukleotīdu ķēde. Tā kā polimerāze izslīd gar DNS ķēdi (kā gredzens uz virves), tā nespēj strādāt ar dubulto spirāli.
Pēc tam tiek veikts atkārtots sildīšanas cikls, kura dēļ tiek atdalītas nukleotīdu ķēdes. Katrā no šiem PCR cikliem vēlamā hepatīta gēna daudzums paraugā palielinās eksponenciāli, un pārējais ģenētiskais materiāls tiek iegūts (aug) lineāri.
Pēc šķīduma attīrīšanas no nukleotīdu atliekām un DNS ķēdes elektroforēzes atdalīšanas ar molekulmasas parametru var viegli noteikt, vai pētāmajā paraugā ir vēlamais gēns.
PCR priekšrocības
Laboratorijas testēšana, izmantojot PCR, ļauj iegūt vēl vairāk informācijas par vīrusa RNS klātbūtni. Nosakot radioaktīvā starojuma līmeņa parametru, ir iespējams noteikt, cik daudz ģenētisko materiālu sākotnēji bija iekļauts pētāmajā paraugā. Hepatīta gadījumā nosaka vīrusa slodzes līmeņa rādītāju.
Vēl viena šīs metodes priekšrocība ir ļoti augsta CR reakcijas jutība. Tas ir daudz augstāks par klasiskajām vīrusu atklāšanas metodēm. Ideālā gadījumā, lai identificētu vēlamo gēnu, PCR gadījumā ir pietiekams tikai viens vīruss paraugā.
Turklāt PCR ir pilnīgi specifisks. Tā primeri ir konstruēti tā, lai tie pilnībā atbilstu vēlamo gēnu unikālajiem reģioniem, kam nav citas sekvences. Tāpat kā pirkstu nospiedumi ir unikāli, katram gēnam ir unikālas nukleotīdu sekvences.
PCR kvalitatīvā analīze
Kvalitatīvā analīze atklāj tikai vīrusa klātbūtni asinīs. Šis tests jāveic visiem pacientiem, kuriem asinīs tika konstatētas C hepatīta antivielas, un tas var izraisīt tikai vienu no divām vērtībām: “konstatēts” vai “nav konstatēts”. Veselīgam cilvēkam normu (atsauces vērtību) vajadzētu “neatklāt”.
Kvalitatīvā pētījuma rezultāti ir īpaši interpretēti:
- Rezultāts ir "atklāts". Tas nozīmē, ka analizētā bioloģiskā materiāla paraugā tika konstatēts CNS vīrusam specifisks RNS fragments, tāpēc ir fakts, ka pacients ir inficēts ar C hepatīta vīrusu. un tajā laikā tas inficē jaunās aknu šūnas organismā.
- Rezultāts nav "atklāts". Šāds spriedums liecina, ka šajā laboratorijā iegūtā bioloģiskā materiāla analizētajā paraugā netika atrasts RNS fragments, kas ir specifisks C hepatīta vīrusam.
C hepatīta vīrusa RNS akūtajā fāzē šādus kvalitatīvus pētījumus ar PCR metodi var noteikt jau pēc 1-2 nedēļām tūlīt pēc organisma inficēšanās, ti, ilgi pirms antivielu parādīšanās pašam hepatītam.
Šā pētījuma neuzticamus testa rezultātus var iegūt:
- piesārņota biomateriāla;
- heparīna klātbūtne pacienta asinīs;
- ķīmisko vai olbaltumvielu vielu (inhibitoru) klātbūtne, kas ietekmē dažādus PCR komponentus.
Lai veiktu PCR kvalitatīvu analīzi, nav nepieciešama īpaša pacienta sagatavošanās pētījumam. Izmantotais materiāls ir vēnu asinis.
Rezultātu novērtēšana
Augstas kvalitātes PCR testiem ir zināma jutība, un atkarībā no pētījuma precizitātes un aprīkojuma līmeņa laboratorijā var mainīties no 10 līdz 500 SV / ml.
Tas nozīmē, ka, ja vīruss asins paraugā ir ļoti zemā koncentrācijā (mazāks par šīs laboratorijas jutības sliekšņa vērtību), tad slimnieka pacienta rezultātu var “neidentificēt”. Sakarā ar to, veicot kvalitatīvu PCR analīzi ar zemu virēmijas līmeni (zemu vīrusu koncentrāciju), piemēram, pacientiem, kas saņem pretvīrusu terapiju, ir ļoti svarīgi zināt šīs diagnostikas sistēmas jutības slieksni.
Diagnostikas sistēmu varianti
Lai kontrolētu viroloģisko atbildes reakciju, ieteicams izmantot pretvīrusu terapijas diagnostikas sistēmas ar jutības slieksni vismaz 50 SV / ml. Šie kritēriji ir izpildīti, piemēram, ar Cobas Ampicolor HCV testu analizatoriem (precizitāte līdz 50 SV / ml), kā arī RealBest HCV RNS (ar jutību 15 IU / ml).
Saskaņā ar PVO ieteikumiem, lai noteiktu C hepatīta galīgo diagnozi, ir nepieciešams balstīt tikai uz C vīrusa RNS trīskārtīgu noteikšanu pacienta seruma paraugos, ja nav citu hepatīta marķieru šķirņu.
Papildus PCR metodēm TMA noteikšana (transkripcijas amplifikācijas metode) tiek izmantota arī HCV RNS noteikšanai pacientiem. Tam ir labākais jutības slieksnis (5–10 SV / ml), bet mūsu valstī šāda testēšanas metode vēl nav ļoti izplatīta.
Atklāto vīrusu modifikāciju diapazons
Šāda kvalitatīva noteikšana C hepatīta vīrusa RNS klātbūtnes serumā ļauj noteikt vairākus šīs vīrusa genotipus. Pašlaik zinātne zina vairāk nekā sešus šīs vīrusa genotipus, kā arī aptuveni 10 šīs slimības apakštipus.
Mūsu valstī ir kopīgi vīrusi 1, 2, 3 genotipi. Laboratorijas var noteikt šādus genotipus: 1a un 1b, 2a, 2b un 2c, kā arī 3, 4, 5a un 6 neatkarīgi no apakštipiem. Visu vīrusu modifikāciju noteikšanas specifiskums ir 100%.
PCR kvantitatīvā analīze
Izmantojot kvantitatīvu PCR testu, nosaka hepatīta vīrusa koncentrācijas līmeni asins paraugos (vīrusu slodze). Šis virēmijas tests (vīrusu koncentrācija) ļauj noteikt noteiktu ģenētiskā materiāla vienību skaitu (vīrusa RNS), kas tiek konstatēts noteiktā daudzumā. Šajā gadījumā nosaka tā koncentrāciju 1 ml, kas atbilst 1 cu. redzēt
Kvantitatīvās analīzes parametrus izsaka skaitļos, šim nolūkam kā mērvienības izmanto starptautiskās vienības (SV) mililitrā (ml), ko sauc par SV / ml. Tagad dažās laboratorijās vīrusa daudzumu var noteikt citās vienībās: kopiju skaits uz ml ir norādīts kā kopijas / ml.
- C hepatīta gadījumā šāda kvantitatīva PCR analīze tiek veikta tieši pirms terapijas sākuma. Tad 1., 4., 12. un 24. nedēļā. Novērtējums 12. nedēļā ir indikatīvs, tas ļauj noteikt terapijas efektivitāti.
- Sagatavošanās analīzei. Lai veiktu PCR kvantitatīvu analīzi, nav nepieciešama īpaša pacienta sagatavošana pētījumam. Pusstundu pirms paraugu ņemšanas nedrīkst smēķēt. Venozā asinis tiek izmantotas kā laboratorijas materiāls.
Rezultātu novērtēšana
Dažādām laboratorijas testu sistēmām šim indikatoram ir dažādi konversijas koeficienti SV / ml. Vidēji viņi izmanto konversijas parametru, kurā 4 kopijas / ml = 1 SV / ml. Tas ir, piemēram, ja laboratorija iegūst PCR analīzes rezultātu 2,4 * 106 kopijas / ml, tad šis parametrs jāsadala 4 un mēs saņemsim 6 * 105 SV / ml.
Tiek uzskatīts, ka slodze 800 000 SV / ml ir augsta, kas aptuveni atbilst 3 000 000 kopijām / ml. Zema virēmija, pēc dažu autoru domām, atbilst kvantitatīvās PCR parametriem zem 400 000 SV / ml.
Kvantitatīvā testa rezultātā galīgos rezultātus var sniegt ne digitālās vērtības veidā, bet gan “zem mērījumu diapazona” vai “nav konstatēts”.
- Novērtējums: "zem mērījumu diapazona." Tas norāda, ka kvantitatīvais tests nespēja noteikt C hepatīta vīrusa RNS, tomēr vīruss pats organismā atrodas ļoti zemās koncentrācijās. To apliecina papildu kvalitātes tests, kas apstiprina vīrusa klātbūtnes faktu.
- Reitings: nav konstatēts. Šis rezultāts norāda, ka kvantitatīvais tests RNS vīrusa paraugā nav atrodams.
Vīrusu slodzes parametrs, pirmkārt, nosaka slimības infekcijas pakāpi, pacienta "infekcijas" līmeni. Jo augstāka ir pacienta vīrusa koncentrācija, jo lielāka ir iespēja to nodot citiem cilvēkiem. Piemēram, dzimumakta laikā ar slimu personu vai vertikāli. Šis kvantitatīvais rādītājs arī palīdz noteikt pacienta ārstēšanas efektivitāti.
ĶKP kvantitatīvās analīzes veikšana ir svarīga pretvīrusu terapijai, novērtējot tā panākumus un plānojot kursa ilgumu. Tādējādi ar ātru ķermeņa reakciju uz ārstēšanu un zemu virēmijas pakāpi terapijas ilgumu var samazināt.
Ja kvantitatīvais PCR parametrs tiek lēnām samazināts, pretvīrusu terapija jāpaplašina vai jāmaina. Ja vīrusu slodzes līmenis ir zems, tad tas ir labvēlīgs faktors terapijā, ja paaugstināts, tad izmantotā metode ir neefektīva un jāmaina zāļu vai to lietošanas metodes.
C hepatīta PCR kvalitatīvā un kvantitatīvā analīze: negatīvs, pozitīvs, transkripts
C hepatīts ir vīrusu aknu slimība, ko izraisa flavivīruss HCV (no C hepatīta vīrusa), kura struktūra satur ribonukleīnskābes molekulu (RNS). RNS ir vīrusa ģenētiskais kods. Tās klātbūtne ļauj analizēt C hepatīta PCR.
HCV risks cilvēkam ir tas, ka tā sauktais seroloģiskais logs (laiks starp infekciju un imūnsistēmas reakcijas parādīšanos) var būt diezgan garš - no vairākām nedēļām līdz sešiem mēnešiem.
Tā neatrod infekciju un nesāk ārstēšanu laikā.
Atkarībā no organisma individuālajām īpašībām HCV nesējs var izpausties akūtā formā, kā arī kā hroniska slimība, kurai nepieciešama ilgstoša un dārga ārstēšana. Konstatējot HCV antivielas, tiek veikta virkne laboratorisku testu, tostarp C hepatīta gadījumā. Šis tests tiek veikts visiem cilvēkiem, kuru asins antivielas pret HCV tika konstatētas.
Kas ir PCR analīze?
C hepatīta PCR laboratoriskā analīze - bioloģiskā materiāla pētījums, lai noteiktu flavavīrusa klātbūtni.
Polimerāzes ķēdes reakcija (kā norāda saīsinājums) parāda ķermeņa vīrusu bojājuma kvantitatīvo vērtību, tā kvalitatīvās īpašības, kā arī RNS saturošā vīrusa genotipu.
Pamatojoties uz to, kā arī pamatojoties uz papildu analīzēm, tiek noteikta terapijas metode un ilgums, kā arī epidemioloģiskais faktors (pārnešanas riska pakāpe uz citu nesēju).
Kas ir C hepatīta RNS analīze?
C hepatīta PCR sauc arī par RNS analīzi (HCV RNS), jo Flavavīruss satur RNS daļiņu ar viriona izmēru 30-60 nm. Viens no šīs mikroorganisma raksturlielumiem ir augsta tendence uz mutācijām.
Katram no vīrusa apakšsugām (genotipiem) ir atšķirīga rezistence, kas izraisa dažādas ārstēšanas metodes un pacienta turpmākās prognozes raksturu.
Bioloģiskais materiāls (venozā asinis) tiek ievadīts tukšā dūšā un parasti tiek testēts ar reāllaika PCR metodi (ļoti jutīga reālā laika diagnostika ar zemāku noteikšanas robežu 15 SV / ml, izmantojot slēgtas automatizētas sistēmas).
Ir arī citi testi, piemēram, COBAS AMPLICOR ar jutību 50-100 SV / ml. Jebkuram laboratorijas testam jutības slieksnis ir svarīgs, t.i. reaģenta spēja noteikt minimālo vīrusa koncentrāciju bioloģiskajā materiālā.
C hepatīta analīzes veidi, izmantojot PCR
C hepatīta PCR ietver trīs svarīgas sastāvdaļas:
- kvalitatīvā analīze;
- kvantitatīvā analīze;
- genotipizēšana.
Šie testi var noteikt virēmijas raksturu, kā arī patogēna ģenētiskās īpašības. Atkarībā no diagnostikas sistēmas jutības pētījums tiek veikts vienu reizi, un dažreiz tiek veikts otrs tests ar jutīgāku reaģentu, lai apstiprinātu vai precizētu rezultātus.
Augstas kvalitātes PCR hepatīts C
C hepatīta PCR analīze kvalitatīvi ir vēl viens izplatīts nosaukums polimerāzes ķēdes reakcijas analīzei. Testa standarta jutība, kas ļauj noteikt vīrusu bojājumu klātbūtni, ir robežās no 10 līdz 500 SV / ml.
Negatīva C hepatīta PCR analīze liecina, ka vīrusa koncentrācija pacienta asinīs ir zemāka par diagnostikas sistēmas jutības slieksni.
Ja augstas kvalitātes PCR sniedza atbildi "nav konstatēts", tad turpmākai apstrādei ir svarīgi uzzināt reaģenta jutības slieksni.
Proteīna frakcijas uz flavavīrusu parādās daudz vēlāk.
C hepatīta kvantitatīvā PCR
C hepatīta PCR kvantitatīvais rādītājs ir vīrusu slodzes rādītājs, kas atspoguļo flavavīrusa RNS koncentrācijas līmeni organismā. Tas ir rādītājs, kas parāda, cik daudz vīrusa RNS fragmentu ir uz vienu kubikcentimetru asins. C hepatīta RNS PCR rezultāti kvantitatīvā testā parastajā sistēmā ir norādīti starptautiskajās vienībās uz mililitru (SV / ml), un tos var reģistrēt dažādos veidos, piemēram, 1,7 miljoni vai 1,700 000 SV / ml.
Hepatīta C kvantitatīvā diagnostika tiek noteikta pacientiem pirms pretvīrusu terapijas uzsākšanas un ārstēšanas 12. nedēļā, lai novērtētu izvēlētās HCV metodes metodes rezultātus. Vīrusu slodze ļauj noteikt trīs svarīgus slimības rādītājus:
- infekciozitāte, t.i. vīrusa pārnešanas riska pakāpe no viena pārvadātāja uz citu (jo lielāka ir flavavīrusa RNS koncentrācija, jo lielāka ir varbūtība inficēt citu personu, piemēram, ar seksuālo kontaktu);
- ārstēšanas metode un efektivitāte;
- pretvīrusu terapijas ilgums un prognoze (jo lielāks ir vīrusu slodze, jo ilgāk ārstēšana ilgst).
C hepatīta kvantitatīvā PCR diagnostika ir atkarīga no laboratorijas testa veida un tās jutības sliekšņa. Standarta apakšējā robeža tiek uzskatīta par rādītāju līdz 600 000 SV / ml, vidējā vērtība ir no 600 000 līdz 700 000 SV / ml. 800 000 SV / ml un augstākus rezultātus uzskata par augstu RNS saturoša vīrusa līmeni.
Genotipēšana
Ņemot vērā HCV lielo mutācijas aktivitāti dabā, testējot ir svarīgi noteikt, kurš vīrusa genotips ir pacienta asinīs. Kopumā ir reģistrēti 11 hepatīta C vīrusa genotipi, kas ietver daudzas apakšsugas (apakštipi). Krievijas Federācijas teritorijā izplatījās 1,2 un 3.
C hepatīta PCR RNS kopā ar genotipēšanu ir ļoti svarīga analīzes sastāvdaļa ļauj ārstam noteikt vīrusa rezistenci (rezistenci), izvēlēties atbilstošās zāles un noteikt ārstēšanas kursu.
Genotipēšana ļauj arī noteikt netiešo aknu stāvokli. Piemēram, HCV 3 genotipu bieži pavada steatoze, kurā tauku uzkrājas orgāna šūnās.
Lai pārbaudītu C hepatīta PCR, asins analīzē jāveido skaitlis, kas nosaka genotipu. Laboratorijas atbildes var teikt „nav ierakstītas” - un tas nozīmē, ka vīruss ir cilvēka asinīs, ko testa sistēma neatklāj. Tas var liecināt, ka genotips nav raksturīgs konkrētam ģeogrāfiskajam apgabalam. Šajā gadījumā analīzi vajadzētu atkārtot ar augstāku diagnostikas sistēmas jutību.
C hepatīta PCR analīzes dekodēšana
C hepatīta PCR kvantitatīvā atšifrējuma tests var balstīties uz iepriekš minētajiem datiem. Iegūstot laboratorijas testu rezultātus, parasti tiek rakstīti šādi dati:
- “Atrasts” / “nav atrasts” (augstas kvalitātes PCR C hepatīta gadījumā);
- RNS saturošo frakciju skaits, piemēram, 831,680 ME / ml (kvantitatīvā PCR analīze);
- skaitlis, kas nosaka HCV genotipu, piemēram - 1, 2, 3, 4;
- Pārbaudes nosaukums visbiežāk ir reālā laika.
C hepatīta PCR analīzes atšifrēšanai vissvarīgākais ir otrais elements, kas parāda vīrusu slodzi, kas nosaka ārstēšanas prognozi, metodi un ilgumu.
Ja C hepatīta PCR tests ir negatīvs un ELISA ir pozitīvs - ko tas nozīmē?
Lai atšifrētu laboratorijas testus, ir svarīgi sazināties ar hepatologu vai infekcijas slimību speciālistu, kurš izskaidro iegūto informāciju saskaņā ar diagnostikas sistēmas tipu un tās jutīguma slieksni. Medicīnas praksē ir daudz asins analīžu datu, kas var maldināt personu bez medicīniskās izglītības.
Piemēram, ja C hepatīta PCR tests ir negatīvs un ELISA ir pozitīvs, tas var nozīmēt, ka pašlaik nav HCV pacienta asinīs, bet viņš agrāk ir cietis no akūta C hepatīta. asinīs ir antivielas, kas pagatavotas pēc vīrusa iebrukuma pagātnē. Bet mūsdienu medicīnas praksē ELISA analīze tiek uzskatīta par nepietiekami uzticamu un bieži vien dod netipiskus rezultātus, tāpēc ārsti to izmanto kā primāro skrīningu. Diagnozējot slimību, speciālisti precīzi vadās pēc PCR testiem.
Noderīgs video
Nākamais videoklips ļoti detalizēti un interesanti norāda, kāda ir PCR metodes būtība, kā tiek veikta analīze:
Secinājums
C hepatīta PCR analīzei parasti lieto vēnu asinis. Visbiežāk tiek iegūts bioloģisks materiāls - ELISA un tieši PCR testam. Lai iegūtu pareizus testa rezultātus, ir jāievēro bioloģisko materiālu laboratorijas savākšanas pamatnoteikumi:
- asins analīzei tiek ievadītas dienas pirmajā pusē tukšā dūšā;
- starp ēdienreizēm un asins savākšanu vajadzētu būt vismaz 8 stundām;
- Pirms testa veikšanas arī alkohols un ceptie pārtikas produkti ir jāizslēdz.
- dienas laikā pirms asins nodošanas ir nepieciešams izvairīties no lielas fiziskas slodzes.
Asins analīžu rezultāti parasti ir gatavi nākamajā dienā.