Skaitot balto asins šūnu skaitu

Princips Leukocītu skaita noteikšana mikroskopijas laikā noteiktā skaitī skaitīšanas kameras kvadrātu un to skaita aprēķināšana 1 litrā asinīs, ņemot vērā asins atšķaidījumu un skaitīšanas kameras tilpumu.

Reaģents: 3-5% etiķskābes šķīdums, tonēts, lai krāsotu leukocītu kodolu ar dažiem pilieniem metilēnzilā šķīduma. Šķīdumam ir zila krāsa, to var uzglabāt ilgu laiku.

Noteikšanas gaita. Sausā testa mēģenē ielej 0,4 ml etiķskābes šķīduma. No pirksta tiek savākti 0,02 ml asins (jūs varat lietot antikoagulantu stabilizētu venozo asinis). Noslaukiet pipetes galu, pēc tam izšļakstiet asinis no mēģenes apakšējās daļas, samaisiet, atkārtoti izsauciet un izsitiet asins un reaģenta maisījumu (pipetēšanu). Iezīmējiet cauruli un atstājiet to līdz skaitīšanai. Uzglabāt asins maisījumu ar etiķskābes šķīdumu ieteicams ne vairāk kā 2-4 stundas.

Asinis atšķaidītas mēģenē ar etiķskābi, rūpīgi samaisa un piepilda ar skaitīšanas kameru. Aizpildītā kamera 1 minūtes tiek atstāta horizontālā stāvoklī, lai noregulētu balto asinsķermenīšu daudzumu. Nemainot kameras horizontālo stāvokli, tās novieto uz mikroskopa galda un zemā palielinājumā (okulārs 10 ×, objektīvs 8 ×) aprēķina baltās asins šūnas 100 lielos laukumos, kas atbilst 1600 maziem.

Lai iegūtu lielāku precizitāti, leikocīti tiek skaitīti pāri tīklam lielos laukumos, kas nav sadalīti mazos laukumos un svītrās, sākot no režģa augšējā kreisā stūra. Lai nodrošinātu labāku kontrastu, redzamības lauka tumšums, kondensatora nolaišana un atvēruma aizvēršana. Šūnas, kas atrodas kvadrāta iekšpusē un atrodas uz jebkurām divām līnijām, tiek skaitītas, lai to pašu šūnu neskaitītu divreiz.

Leukocītu skaita aprēķins tiek veikts pēc formulas:

kur X ir leikocītu skaits 1 μl asinīs; un - leikocītu skaits 100 lielos laukumos; 20 - asins atšķaidīšana; 100 ir lielo kvadrātu skaits; 250 ir konversijas koeficients uz 1 μl, jo viena liela kvadrāta tilpums ir 1/250 μl (kvadrāta puse ir 1/5 mm, augstums ir 1/10 mm).

Praksē, lai aprēķinātu leikocītu skaitu 1 μl asinīs, to skaits 100 lielajos laukumos tiek reizināts ar 50 un 1 litrā - iegūto vērtību reizina ar 106.

Piezīme Aprēķinot leikocītos, kļūda ir neizbēgama 6–8% gadījumu.

1. Tā kā perifēriskajā asinīs ir liels skaits normocītu, tie tiek uzskaitīti leikocītu (gan leikocītu, gan normocītu - kodētu šūnu) skaitā. Lai pareizi noteiktu leikocītu skaitu, no kopējā kodolu asins šūnu skaita vajadzētu atņemt normocītu skaitu.
2. Atlikušās kļūdas ir līdzīgas tām, kas rodas, aprēķinot sarkano asins šūnu skaitu skaitīšanas kamerā.

Leukocītu skaits

Lai savāktu asinis leikocītu maisītājā līdz atzīmei 0.5. Nekavējoties pievienojiet asinīm atšķaidītu 3% etiķskābes šķīdumu, lai atzīmētu 11. Rūpīgi sajauciet kapilāra saturu un uzpildiet Goryaev kameru. Skaitīšana notiek vismaz 100 lielos laukumos. Tās ir lielas, neslīpētas līnijas, kas Goryaev kameras tīklā ir iedalītas četrās daļās. Aprēķiniet leikocītu skaitu 1 l asinīs pēc formulas:

L = N x 4000 x 20 x 10 6

kur: N ir leikocītu skaits simt lielu kvadrātu; 4000 ir reizinātājs, kas samazina neliela kvadrāta tilpumu līdz 1 μl asins tilpumam; 20 - asins atšķaidīšanas pakāpes korekcija; 1600 - leikocītu skaits mazos laukumos; 10 6 - mikrolīmeņu skaits 1 l.

Ieteikumi reģistrācijai

Visbeidzot, salīdziniet iegūtos rezultātus ar normālajām vērtībām.

Lab № 7.3

Hemoglobīna daudzuma noteikšana asinīs

194.48.155.245 © studopedia.ru nav publicēto materiālu autors. Bet nodrošina iespēju brīvi izmantot. Vai ir pārkāpts autortiesību pārkāpums? Rakstiet mums Atsauksmes.

Atspējot adBlock!
un atsvaidziniet lapu (F5)
ļoti nepieciešams

Skaitot balto asins šūnu skaitu

Leukocitoze var būt absolūta (patiesa) un relatīvā (pārdales).

Absolūtā leikocitoze tiek novērota akūtiem iekaisuma procesiem, audu nekrozei, akūtām bakteriālām infekcijām (izņemot vēdertīfu, brucelozi, tularēmiju uc), alerģiskiem stāvokļiem, ļaundabīgiem audzējiem (ar audu iznīcināšanu), slēgtiem galvas traumām un asiņošanu smadzenēs, diabētu. urēmiskā koma, šoks, akūta asins zudums, kā primārā reakcija - ar staru slimību. Ar leikēmiju notiek ievērojams leikocītu skaita pieaugums.

Relatīvais (redistributīvs) ir sekas, kas rodas, saņemot leikocītus asins plūsmā no orgāniem, kas kalpo viņas depo. Tas notiek pēc ēšanas (pārtikas leikocitozes), karstām un aukstām vannām, spēcīgām emocijām (vegetovaskulāra leikocitoze), intensīvam muskuļu darbam (myogen leukocytosis) utt.

Leukopēnija Leukopēniju uzskata par kaulu smadzeņu funkcionālās spējas inhibēšanas rādītāju toksisku vielu (arsēna, benzola uc), dažu medikamentu (sulfanilamīdu, hloramfenikola, butadiona, imūnsistēmas, ciklofosfamīda uc), vīrusu (gripas, vīrusu hepatīta) iedarbības rezultātā., masalas uc), mikrobiem (vēdertīfs, bruceloze uc), jonizējošam starojumam, rentgena stariem un hipersplenismam (palielināta liesas funkcija).

Leukocitozi un leikopēniju reti raksturo proporcionāls visu veidu leikocītu skaita pieaugums (samazinājums) (piemēram, leikocitoze ar asins sabiezējumu); vairumā gadījumu tiek palielināts (samazināts) jebkura šūnu tipa skaits, tādēļ tiek izmantoti termini "neitrofīlija", "neitropēnija", "limfocitoze", "limfopēnija", "eozinofīlija", "eozinopēnija", "monocitoze", "monocitopēnija"., "Basofīlija".

Leukocītu skaita pārmaiņu klīniskajā novērtējumā liela nozīme ir atsevišķu leikocītu formu, ti, leikocītu formulas procentuālajai attiecība.

Veselīgas personas leikocītu asins skaitīšana:

Relatīvais apjoms Absolūtā summa

Basofīli ……………………….0-1% 0-0.0650 x 10 9 / l

Eozinofīli …………………….0,5-5% 0,02-0,30 x 10 9 / l

Neitrofīli: - mielocīti............. 0% nav

- sadurts... 1-6% 0,040-0,300 x 10 9 / l

- segmentēti….47-72% 2,0-5,5 x 10 9 / l

Limfocīti …………………………….19-37% 1,2-3,0 x 10 9 / L

Monocīti ……………………….3-11% 0,09-0,6 x 10 9 / L

Leukocītu skaitīšana tiek veikta iekrāsotajās perifērās asinīs. Lai pareizi interpretētu pētījumus par leikocītu formulu, ieteicams skaitīt absolūtos daudzumos, bet ne relatīvajos. Visbiežāk izmantotās Romanovska-Giemsa, Pappenheimas gleznu gleznošanas metodes. Iegremdējot tiek skaitītas vismaz 200 šūnas, un pēc tam iegūst noteiktu veidu leikocītu procentuālo attiecību. Leukogrammas analīze, ņemot vērā citus asins parametrus un klīnisko attēlu, ir vērtīga pārbaudes metode, tā palīdz diagnosticēt un noteikt slimības prognozi.

Galvenie neitrofilijas cēloņi.

Akūtas bakteriālas infekcijas - lokalizētas un vispārinātas.

Audu iekaisums vai nekroze.

Zāļu iedarbība (kortikosteroīdi).

Galvenie neitropēnijas cēloņi.

Infekcijas - baktērijas (vēdertīfs, bruceloze, tularēmija, paratifīds) un vīruss (infekciozs hepatīts, masalas, gripa, masaliņas un citi).

Mezelotoksiska iedarbība un granulocitopoēzes nomākums (jonizējošais starojums; ķīmiskie līdzekļi - benzols, anilīns, DDT; zāļu iedarbība - citostatiskie līdzekļi un imūnsupresanti; B vitamīns₁₂-folskābes deficīta anēmija, akūta aleukēmiska leikēmija, aplastiska anēmija).

Antivielu iedarbība (imūnās formas) - paaugstināta jutība pret zālēm, autoimūnām slimībām (SLE, reimatoīdais artrīts, hroniska limfātiskā leikēmija), izoimūnu izpausmes (jaundzimušo hemolītiskā slimība).

Pārdalīšana un nogulsnēšanās orgānos - šoka apstākļi, slimības ar splenomegāliju un hipersplenismu.

Iedzimtas formas (ģimenes labdabīga hroniska neitropēnija).

Galvenie eozinofilijas cēloņi.

Parazītu invāzijas (trihineloze).

Hroniski ādas bojājumi - psoriāze, pemphigus, ekzēma.

Audzēji (leikozes eozinofīlie varianti).

Citas slimības - fibroplastisks endokardīts Lefflera, skarlatīna.

Infekciju un iekaisuma slimību atveseļošanās fāzē (labvēlīga prognozes zīme).

Eozinopēnijas (aneozinofilijas) cēloņi.

Palielināta adrenokortikosteroīdu aktivitāte organismā.

Bāzofilijas galvenie cēloņi:

Hroniska mieloīda leikēmija un eritrēmija.

Galvenie monocitozes cēloņi.

Subakūtas un hroniskas baktēriju infekcijas.

Parazitāras infekcijas - leishmaniasis, malārija.

Hemoblastoze - monocītiska leikēmija, limfogranulomatoze, limfomas.

Citi apstākļi ir SLE, sarkoidoze, reimatoīdais artrīts, infekcioza monocitoze; atkopšanās periodā no infekcijām, atstājot agranulocitozi pēc splenektomijas.

Monocītu skaita samazināšanās ir svarīga galvenokārt limfocītu-monocitisko attiecību novērtēšanā plaušu tuberkulozē.

Galvenie limfocitozes cēloņi.

Infekcijas - akūta vīrusu (infekcioza mononukleoze, masalas, masaliņas, vējbakas), hroniskas baktērijas (tuberkuloze, sifilis, bruceloze), vienšūņu (toksoplazmoze).

Hemoblastoze (limfocītiskā leikēmija, limfoma).

Citas slimības - hipertireoze, Adisona slimība, B vitamīns₁₂-folijas deficīta anēmija, hipo-un aplastiska anēmija.

Limfocitopēniju novēro SLE, Hodžkina slimībā, plaši izplatītā limfmezglu tuberkulozē, nieru mazspējas terminālajā stadijā, akūtu staru slimību, imūndeficīta stāvokļiem, lietojot glikokortikoīdus.

Dažu leikocītu veidu palielināšanās vai samazināšanās asinīs var būt relatīva vai absolūta. Ja mainās tikai kāda veida balto asinsķermenīšu veids, tad notiek relatīvā neitrofīlija, relatīvā eozinopēnija utt. Jebkura veida leikocītu absolūtā satura, tas ir, šo šūnu skaita pieaugumu vai samazinājumu asins tilpuma vienībā, sauc par absolūto neitrofiliju, absolūto eozinopēniju utt.

Formula pārvietošana pa kreisi (palielinot neitrofilu jauno formu skaitu) ir iekaisuma vai nekrotiska procesa pazīme organismā.

Leukocītu formulas maiņa pa labi ir raksturīga radiācijas slimībai un B vitamīnam₁₂-folskābes deficīta anēmija.

Visu veidu granulēto leikocītu - granulocītu (neitrofilu, eozinofilu, basofilu) skaita trūkumu vai būtisku samazinājumu apzīmē ar terminu agranulocitoze. Atkarībā no sastopamības mehānisma izceļas mielotoksisks (jonizējošā starojuma, citostatiskās devas ietekme) un imūnsistēma (haptens un autoimūna agranulocitoze).

Leukocītu skaits

Skaitīšanas metode kamerā. Caurules metodes iegūšana un atšķaidīšana. Caurulē (vēlams Vidalevskaya) ievada 0,4 ml šķīdinātāja šķidruma un 0,02 ml kapilāro asiņu. Iegūto atšķaidījumu praktiski uzskata par 1:20. Par šķīdinātāju parasti izmanto 3-5% etilskābes šķīdumu, kas tonēts ar metilēnzilu (etiķskābes lizē eritrocītus, metilēnzilā iekrāso leikocītu kodolu). Pirms kameras uzpildīšanas rūpīgi sakrata Goryaeva caurule ar atšķaidītu asiņu. Kameru piepilda tāpat kā sarkano asins šūnu skaitīšanai.

Leukocīti ir daudz mazāki par eritrocītiem (1–2 uz lielu kvadrātu), tāpēc, lai iegūtu precizitāti, skaitļi tiek veikti 100 lielos laukumos (nešķiroti). Aprēķins: 100 lielie laukumi (1600 mazi) tiek uzskaitīti kā leikocīts.
Atceroties, ka neliela kvadrāta tilpums ir 1/4000 mm3, un asinis atšķaida 20 reizes, aprēķina leikocītu skaitu 1 μl asinīs: 4000 20 un dala ar 1600 = a x 1/2. Praktiski, lai iegūtu faktisko leikocītu saturu 1 μl asinīs, ir pietiekami sadalīt uz pusi no aprēķinā iegūtā skaita un pievienot 2 nulles. Vidējā metode ir ± 7%.

Precīzāka (2-3% kļūda) un perfekts ir leikocītu skaits, izmantojot elektroniskās ierīces. Leukocītu skaitīšana daļiņu skaitītājos tiek veikta saskaņā ar to pašu principu kā eritrocītiem. Pirms asinis atšķaida un sajauc ar jebkuru reaģentu, kas lizē sarkano asins šūnu. „Technicon” autoanalizatorā kā „Culter” un „Celloskop” ierīcēs tiek izmantots etiķskābes šķīdums - saponīns vai sapoglobīns, ko pievieno atšķaidītam (1: 500, 1: 700) izotoniskā nātrija hlorīda šķīdumā (6 pilieni uz 20 ml). audzēšana).

Asins leikocītu skaitīšana tiek veikta ar krāsotām perifērajām asinīm.
Labāk ir rēķināties ar plānāko punktu, kas atrodas netālu no uztriepes, vismaz 200 šūnām (izņemot izteiktu leikopēniju), un tad iegūst noteiktu veidu balto asinsķermenīšu procentuālo attiecību. Skaitīšana ir ieteicama tādā pašā kārtībā: puse no šūnām jāuzskaita augšpusē, puse no insulta apakšas, nenonākot pie pašas malas un vidus, zigzagging (3-4 redzes lauki gar gājienu, 3-4 lauki taisnā leņķī pret insultu, tad 3-4 lauki uz sāniem, kas ir paralēli malai, atkal taisnā leņķī uz augšu un tā tālāk uz vienu pusi).

Krāsu sagatavošana. Rūpīgi nomazgāts un attaukots stikls (tā mala) injekcijas vietā skar asins pilienu. Smear padara slīpēšanas stiklu, liekot to 45 ° leņķī pret slaidu priekšā kritiena priekšā. Pēc tam, kad stikls ir nokritis uz šo pilienu, viņi gaida, līdz asinis izplūst gar tās malu, tad ar ātru kustību viņi veic slīpēšanas stiklu uz priekšu, neņemot to prom no objekta, pirms tas izžūst visu pilienu.

Pareizi izgatavotai uztriepei ir dzeltenīga krāsa (plānas), nesasniedz stikla malas un beidzas ar pēdām (ūsas).

Sauso smērvielu krāsošana, kas ražota pēc iepriekšējas fiksācijas. Vislabākā fiksācija tiek panākta absolūtā metilēnalkoholā (3-5 minūtes) vai Nikiforov maisījumā ar vienādām absolūtā etanola un ētera daļām (30 minūtes).

Galvenās hematoloģiskās krāsas ir metilēnzils un tā atvasinājums - debeszils I (metilēna debeszils) un debeszils II (vienādu daļu debeszils I un metilēnzils), skābā ūdenī šķīstošā dzeltenā eozīna.

● Romanovska-Giemsa glezna. Romanovska-Giemsa krāsai (rūpnieciski izgatavota) ir šāds sastāvs: Azur II - 3 g, ūdenī šķīstošs dzeltens eozīns - 0,8 g, metilspirts - 250 ml un glicerīns - 250 ml. Darba krāsu šķīdumu sagatavo ar ātrumu 1,5-2 pilienus gatavās krāsas uz 1 ml destilēta ūdens. Krāsu pārlej uz uztriepes ar iespējami augstāku slāni; krāsošanas laiks - 30-35 minūtes Pēc šī perioda tamponus mazgā ar ūdeni un žāvē gaisā. Šajā metodē ir iespējams labi atšķirt kodolu, bet citoplazmas neitrofilā granulācija ir daudz sliktāka, tāpēc to plaši izmanto perifēro asins uztveršanas krāsošanai.

● Kombinēta maija-Grunvaldes-Romanovska-Giemsa krāsošana pēc Pappenheima. Gatava krāsviela, maija-Grunvaldes fiksators, kas ir eozīnmetilēna zilā šķīdums metilēnalkoholā, 3 minūtes tiek pipetēts uz fiksētas uztriepes. Pēc 3 minūtēm krāsai, kas pārklāj šķīdumu, pievieno vienādu daudzumu destilēta ūdens un krāsošana turpinās vēl vienu minūti. Pēc tam krāsa tiek nomazgāta un uztriepes tiek žāvētas gaisā. Tad žāvēto uztriepi pārkrāso ar svaigi pagatavotu Romanovsky krāsas šķīdumu 8-15 minūtes. Šī metode tiek uzskatīta par labāko, jo īpaši attiecībā uz smadzeņu kauliņu uztriepēm.

Leukocītu skaita pieaugumu perifēriskajā asinīs virs normālā līmeņa sauc par leikocitozi, samazinājumu sauc par leikopēniju. Leukocitozi (leikopēniju) reti raksturo visu veidu leikocītu skaita proporcionāls palielinājums (samazinājums), piemēram, leikocitoze ar asins sabiezēšanu. Vairumā gadījumu palielinās jebkura šūnu tipa skaits (samazinājums). Atsevišķu leikocītu veidu palielināšanās vai samazināšanās asinīs var būt relatīva vai absolūta, atkarībā no kopējā leikocītu skaita - normāla, paaugstināta vai pazemināta. Leukocītu skaita izmaiņas, individuālo formu un morfoloģijas attiecība ir atkarīga no patogēna veida un virulences, patoloģiskā procesa rakstura, kursa un apjoma, organisma individuālās reakcijas.

Leukocīti (leucocytus)

Leukocīti. Leukocītu kvantitatīvā noteikšana. Leukocītu skaitīšana, izmantojot kameru Goryaeva. Leukocītu kvantitatīvais saturs. Leukocitoze.

Baltās asins šūnas

Leukocītu skaits asinīs ir atkarīgs gan no to veidošanās ātruma, gan no to mobilizācijas no kaulu smadzenēm, kā arī no to izmantošanas un migrācijas audos (uz bojājumiem), plaušu un liesas sagūstīšanu. Šos procesus savukārt ietekmē vairāki fizioloģiski faktori, un tāpēc leikocītu skaits veselā cilvēka asinīs ir pakļauts svārstībām: tas palielinās dienas beigās, fiziskās slodzes, emocionālā stresa, proteīnu pārtikas patēriņa un straujas apkārtējās temperatūras izmaiņas.

Leukocītu kvantitatīvā noteikšana

Leukocīti tiek skaitīti, izmantojot Goryaev kameru un izmantojot automātiskos skaitītājus.

Leukocītu skaitīšana, izmantojot kameru Goryaeva

Ar in vitro metodi, lai ņemtu leikocītu skaitu asinīs:

• Caurulē ielej 0,4 ml 3-5% etiķskābes šķīduma, kas tonēts ar metilēnzilu. Izmantojiet kapilāru pipeti, lai 20 μl asinis izvilktu no jauna piliena (atšķaidīšana 20 reizes), uzmanīgi uzsitiet to mēģenē ar reaģentu un izskalojiet pipeti. Labi samaisa;
• tīrā un sausā pārseguma stikls tiek berzēts uz kameru tā, lai kontakta vietā veidotos varavīksnes gredzeni;
• asinis, kas atšķaidītas mēģenē, labi samaisa. Apaļa stikla stieņa gals aizņem asins pilienu un nogādā to kameras pulēta stikla malā;
• pēc kameras piepildīšanas tas atstāj uz 1 min ilgu laiku leikocītu nogulsnēšanai;
• Leukocīti tiek uzskatīti par zemu palielinājumu (objektīvs × 8 vai × 9, okulārs × 10 vai × 15) ar tumšāku redzamības lauku (ar pazeminātu kondensatoru vai sašaurinātu diafragmu);
• apmierinošiem rezultātiem, leikocīti tiek skaitīti 100 lielos laukumos.

Zinot lielā laukuma tilpumu un asins atšķaidīšanas pakāpi, atrodiet leikocītu skaitu 1 μl un 1 l asinīs. Lielā laukuma puse ir 1/5 mm, platība ir 1/25 mm2, telpas laukums virs šī laukuma ir 1/250 mm3.

Baltās asins šūnas skaitīšanas formula:

kur B ir leikocītu skaits 100 lielos laukumos;
P - atšķaidīšanas pakāpe (20).

Leukocītu skaits

Norm: 4,0–9,0 × 10 9 / L

Tiek aicināts palielināt leikocītu skaitu virs 9,0 × 10 9 / l
leikocitoze, to skaita samazināšanās zem 4,0 × 10 9 / l - leikopēnija. Tomēr pat 3,5 × 10 9 1 l leikocītu vairākiem indivīdiem var būt norma. Saskaņā ar literatūru šādi cilvēki ir palielinājuši imūnsistēmu, un visticamāk, tie saslimst, kas, šķiet, ir saistīts ar nepieciešamību pēc imūnās atbildes uz leikocītu rezervi audos, kur ir 50–60 reizes vairāk nekā asinsritē. Protams, veseliem indivīdiem ar zemu balto asins šūnu skaitu perifēriskajā asinīs attiecīgi palielinās to rezerves audos. Šī parādība izskaidrojama ar iedzimtu un ģimenisku raksturu vai parazīmisko nervu sistēmas ietekmes palielināšanos.

Leukopēnija var būt funkcionāla un organiska.
Funkcionālā leikopēnija ir saistīta ar asins veidošanās traucējumiem un tiek novērota:

• ar dažām baktēriju un vīrusu infekcijām (vēdertīfu, gripu, bakas, masaliņām, Botkin slimību, masalām);
• narkotiku iedarbībā (sulfonamīdi, pretsāpju līdzekļi, pretkrampju līdzekļi, pretaizdzīšanas līdzekļi, citostatiskie un citi medikamenti);
• muskuļu darba laikā, svešu olbaltumvielu ieviešana, nervu un temperatūras ietekme, bads, hipotoniskie stāvokļi;
• viltus leikocitopēnija var būt saistīta ar leikocītu agregāciju ilgstošas ​​asins uzglabāšanas laikā istabas temperatūrā (vairāk nekā 4 stundas).

Organiskā leikopēnija, ko izraisa kaulu smadzeņu aplazija un tās aizstāšana ar taukaudiem, rodas, ja:

• aplastiska anēmija;
• agranulocitoze;
• leikopēniskā leikēmija;
• dažas Hodžkina slimības formas;
• jonizējošais starojums;
• hipersplenisms (primārā un sekundārā);
• kolagēna slimības.

Leukocitoze

Leukocitoze ir asinsrades sistēmas reakcija uz iedarbību
eksogēni un endogēni faktori. Ir fizioloģiska un patoloģiska leikocitoze.

Fizioloģiskā leikocitoze ir:

• gremošanas līdzekļi - pēc ēšanas, īpaši proteīnu daudzums; leikocītu skaits nepārsniedz 10,0–12,0 × 10 9 / l un pēc 3-4 stundām tas normalizējas;
• ar emocionālu stresu (adrenalīnu), smagu fizisku slodzi, dzesēšanu, pārmērīgu saules iedarbību (saules apdegumu), vairāku hormonu (katecholamīnu, glikokortikosteroīdu uc) ievadīšanu grūtniecības otrajā pusē, menstruāciju laikā un nevienmērīga leikocītu sadalījuma dēļ asinīs mainstream.

Patoloģiskā leikocitoze ir sadalīta absolūtā un relatīvā.

Absolūtā leikocitoze - leikocītu skaita palielināšanās asinīs līdz vairākiem simtiem tūkstošu (100,0–600,0 × 10 9 / l un vairāk).

• Visbiežāk novērota leikēmija: hroniskā leikēmijā - 98-100% gadījumu akūtā leikēmijā - 50-60%. Leukocītu šūnu attiecības maiņa kaulu smadzenēs un asins punktos kalpo par pamatu leikēmijas diagnostikai.

Ir novērota relatīva leikocitoze:

• akūti iekaisuma un infekcijas procesi, izņemot vēdertīfu, gripu, bakas, masaliņas, Botkin slimību, masalus. Lielākā leikocitoze (līdz 70,0–80,0 × 10 9 / l) novērota sepsi;
• toksisku vielu (kukaiņu indes, endotoksīni), jonizējošā starojuma (tūlīt pēc apstarošanas) ietekmē;
• kortikosteroīdu, adrenalīna, histamīna, acetilholīna un digitālo preparātu iedarbības rezultātā;
• ar audu dezintegrāciju (nekrozi), miokarda infarktu, perifēro artēriju trombozi, attīstot gangrēnu, apdegumus, eksudatīvu pleirītu, perikardītu, urēmiju, aknu komu;
• ievērojams asins zudums traumās, iekšējā, ginekoloģiskā un cita veida asiņošana.

Leikocītu skaita pieaugums infekcijas slimībās vairumā gadījumu ir saistīts ar leikocītu formulas maiņu pa kreisi

Aprēķinot leikocītu un trombocītu skaitu

Faktori, kas ietekmē balto asinsķermenīšu pētījuma pareizību

- ilgstoša asins uzglabāšana istabas temperatūrā

Leukocītu satura normas asinīs

Vecums leikocītu skaits

- 1 diena 11.6 - 22.0

- 1 nedēļa 8.1.- 14.3

- 1 mēnesis 7.6 - 12.4

- Pieaugušie 4,0 - 9,0

Metodes leikocītu skaita noteikšanai asinīs.

- Leukocītu skaita skaitīšana skaitīšanas kamerā

- Leukocītu skaitīšana hematoloģijas analizatoros

Leukocītu skaita noteikšana skaitīšanas kamerā.

- Leukocītu skaita noteikšana mikroskopā tiek veikta pēc sarkano asins šūnu lizēšanas 100 lielos skaitīšanas režģa laukumos un pārrēķinot 1 litram asins, pamatojoties uz kvadrātu tilpumu un asins atšķaidījumu. Leukocītu skaits jāveic 2 - 4 stundu laikā pēc asins savākšanas.

- Ja perifēro asiņu asinsķermenīši ir kodēti, tie netiek lizēti un skaitīti kopā ar leikocītiem. Šajā gadījumā, lai noteiktu patieso leikocītu skaitu, šūnu skaits sarkanajā rindā tiek atņemts no kopējā skaitīto šūnu skaita.

- Piemēram: kopējais leikocītu skaits aprēķinā kamerā (vai analizatorā) -45x109 / l. Aprēķinot leikocītu formulu, tika konstatēts, ka uz 100 leikocītiem ir 50 eritroblastu (normoblastu).

Mēs aprēķinām patieso leikocītu skaitu asinīs:

150 šūnas - 45 x 109 / l

100 šūnas (leikocīti) - X

X = 100 * 45 * 10 / l / 150 = 30 * 10 / l

Tādējādi patiesais leikocītu skaits asinīs ir 30 x 109 / l.

Galvenie kļūdu avoti leikocītu aprēķināšanā kamerā:

- Nepareiza asins un etiķskābes tilpuma attiecība, kas ņemta mēģenē.

- Nepareizi sagatavots etiķskābes šķīdums (koncentrācijā, kas pārsniedz 5%, var izdalīties daži leikocīti, kas novedīs pie rezultāta nenovērtēšanas).

- Parauga ilgstoša iedarbība temperatūrā virs 28 ° C, kas var paātrināt leikocītu izdalīšanos paraugā un novest pie rezultāta nenovērtēšanas.

- Nepareiza Goryaev kameras aizpildīšana. Tāpat kā ar sarkano asins šūnu aprēķināšanu, kamerai jāpaliek 1 minūti, lai noregulētu šūnas.

- Pēc iepriekšējās definīcijas Goryaev kamera netika pietiekami labi nomazgāta. Kamerā palikušie leikocīti var pārvērtēt analīzes rezultātus.

Trombocītu skaitīšanas metodes

- skaitīšanas kamerā

Katrai metožu grupai ir priekšrocības un trūkumi.

- Trombocītu skaitīšana kamerā ir pietiekami precīza, nav nepieciešams aprēķināt sarkano asins šūnu skaitu. No otras puses, šī metode ir darbietilpīgāka, jo trombocīti dabiskā formā tiek attēloti ar maziem un slikti kontrastētiem elementiem. Metodes trūkums ir trombocītu skaitīšana tuvākajās stundās pēc asins ņemšanas.

- Trombocītu skaita noteikšana asinīs ir ievērojami zemāka par kameras metodi vai automātiskajiem skaitītājiem. Kļūdas asins uztveršanas skaitīšanā var būt sliktas uztriepes kvalitātes un ar to saistītās nevienmērīgās trombocītu izkliedes dēļ, neprecīza sarkano asins šūnu skaita noteikšana. Būtisks šīs metodes trūkums ir nepieciešamība vienlaicīgi skaitīt trombocītu un sarkano asins šūnu daudzumu asinīs. Tā priekšrocība ir spēja jebkurā laikā pētīt trombocītus neatkarīgi no asins savākšanas laika.

- Trombocītu noteikšanas metode, izmantojot hematoloģisko analizatoru, ļauj precīzi noteikt trombocītu skaitu, to vidējo tilpumu un sadalījumu pēc tilpuma.

Leukocītu skaits

Leukocītu skaitu aprēķina, izmantojot automātisko skaitītāju vai Goryaev kamerā. Lai aprēķinātu leikocītus kamerā, tiek pagatavots Turk šķidrums - etiķskābes šķīdums, kas tonēts ar metilēnzilā ūdens šķīdumu (9 ml 10% etiķskābes pievieno 0,1 ml 0,1% metilēnzilā šķīduma). Testa mēģenē ielej 0,4 ml šķidruma Türk. Iegūstiet tieši 0,02 ml asiņu, uzmanīgi pievienojiet atšķaidīšanas šķidrumam. Asins atšķaidīšana ir 1:20. Labi samaisa un atstāj uz 4 minūtēm. Piepildiet kameru Goryaeva, rūpīgi sakratot mēģeni ar atšķaidītu asiņu. Kamera tiek atstāta uz 1 min. Uz plakanas virsmas leikocītu nogulsnēšanai. Tad leukocīti tiek skaitīti zemā mikroskopa palielinājumā (objektīvs 8, okulārs 10 vai 15) ar tumšāku redzamības lauku (ar kondensatoru nolaižot vai sašaurinātu diafragmu). Leukocīti tiek uzskatīti par 100 neizpaustiem lieliem laukumiem, kas atbilst 1600 maziem. Šūnu skaitīšanas rezultāti lielos kvadrātos apkopo un aprēķina to skaitu 1 μl asinīs, izmantojot formulu:

kur X ir leikocītu skaits 1 μl asinīs; A - šūnu skaits, kas skaitīti 100 lielos laukumos, 1600 - mazo kvadrātu skaits; 20 - asins atšķaidīšana; 4000 ir reizinātājs, kas rada 1 μl asins tilpumu, pamatojoties uz neliela kvadrāta tilpumu (1/4000 μl).

Leukocītu formulas skaitīšana: tiek pētītas krāsotas perifērās asinis. Nepieciešams nosacījums, lai pareizi ņemtu vērā asins šūnu morfoloģiskās īpašības, ir pareizi veidota un labi iekrāsota asins uztriepes. Uz sausiem, tīriem, labi attaukotiem slaidiem sagatavo asins uztriepes, kas izturētas Nikiforov maisījumā (etilspirts 96 ° un dietilēteris 1: 1). Ņemot stikla slaidu garām malām, pieskarieties tās virsmai ar asins pilienu (bet ne ādu), kas atbrīvojas no punkcijas, vai uzliekiet pilienu asins ar mikropipeti vai kapilāru. Stikla slaidu tur uz galda vai kreisajā rokā šaurām malām. Izmantojot labo roku, uzklājiet stikla šķīvi ar šauru malu ar asinīm pa kreisi no kritiena 45 ° leņķī un virziet to pa labi, līdz tas pieskaras asinīm. Viņi gaida, līdz asinis izplatīsies visā grīdas stikla malā, un pēc tam ar ātru, ātru kustību ved to no labās uz kreiso pusi, līdz viss piliens ir izsmelts. Asins pilienam jābūt mazam un proporcionālam tā, lai viss uztriepes tiktu novietots uz stikla, nesasniedzot 1-1,5 cm pirms tās malas. Labi veidots uztriepes ir plānas, dzeltenā krāsā un beidzas ar "slotu". Gaisa žāvētas asins uztriepes tiek ievietotas speciālos traukos fiksēšanai vai parastos stikla glāzēs, kas piepildītas ar fiksējošo šķidrumu (metilspirts, fiksācijas laiks 3-5 minūtes; etilspirts, 30 minūtes; Nikiforova maisījums, 20-30 minūtes). Fiksētie preparāti tiek žāvēti gaisā un pēc tam iekrāsoti ar Romanovsky-Giemsa krāsu. Gatavo krāsu šķīdums Romanovsky-Giemsa (azureozīns) atšķaidīja 1:10 vajadzīgajā krāsā. Fiksētās uztriepes ielej ar atšķaidītu krāsu, kas uzlej uz uztriepes ar iespējami augstāku slāni. Krāsošana ilgst atkarībā no gaisa temperatūras telpā no 25 līdz 45 minūtēm. Pēc krāsas nokrāsošanas, nomazgājiet krāsu ar destilētu ūdeni un ieliekiet vertikāli insultus koka kājā žāvēšanai. Asins uztveršanas mikroskopiju veic, iegremdējot 100 × 10 palielinājumu. Leukocītu skaitīšana notiek pa zigzaga līniju (“Meander line”), skaitot 100-200 šūnas, ņemot vērā atsevišķu leikocītu formu skaitu: stab un segmentētos neitrofilus, eozinofīlus, basofilus, monocītos, limfocītus. Aprēķiniet katra šūnas veida procentuālo daļu.

Fagocītu un limfocītu absolūtā skaita aprēķināšana Fagocītu (neitrofilu un monocītu) un augstāko mugurkaulnieku limfocītu absolūto skaitu aprēķina, pamatojoties uz datiem par leikocītu skaitu perifērās asinīs un leikocītu formā.

Fagocītu funkcijas tests

Fagocītiskā indeksa un fagocītu skaita noteikšana

Ir izstrādāts liels skaits metožu, lai novērtētu leikocītu uzsūkšanos un sagremošanu. Visi no tiem ir balstīti uz fagocītu spēju absorbēt svešķermeņus, kas veido testa sistēmu (specifisks mikroorganisma veids, zimozāns, latekss - absorbcijas objekts). Atklāšana tiek veikta in vitro vai in vivo. Vispārējais noteikšanas kurss ir šāds: Heparinizētu vai citrātu svaigu asiņu (vai fagocītu suspensiju) sajauc ar vienādu tilpumu suspendēta ikdienas mikrobu suspensija (Saccharomyces cerevisiae, Staphilococcus aureus, S. albus, E.coli, A. nydrophila) vai cits absorbcijas objekts. Maisījumu viegli sajauc un ievieto termostatā (37-40ºС - siltās asinīs atkarībā no ķermeņa normālās temperatūras, 26 ° C - karstumizturīgām zivīm un zemākai aukstumainai). Pēc 15, 30, 45, 60 un 90 minūtēm smērvielas sagatavo uz priekšmetstikliņiem, žāvē, piestiprina ar metilspirtu vai Nikiforova maisījumu un iekrāso pēc Romanovska-Giemsa. Viņi raugās uz iegremdētajām uztriepēm un nosaka fagocītu aktivitāti - fagocītu, kas piedalās fagocitozē, procentuālo daļu, fagocītu indeksu - viena fagocītu leukocīta uztverto testa mikrobu skaitu, fagocītu skaitu - vidējo fagocītu objektu skaitu uz 1 aktīvo neitrofilu. Rādītāju novērtēšana dažādos laika intervālos ļauj novērtēt fagocitozes dinamiku. Parasti pēc 90 minūtēm fagocītu indeksam vajadzētu būt zemākam nekā pēc 45 minūtēm un 60 minūtēm, pateicoties mikrobiem. Gremošanas pārkāpuma gadījumā tas nemainās.

Fagocītu funkcionālās aktivitātes novērtējums ar nitro-zilo tetrazola redukcijas reakciju (NBT tests)

Šis tests ir fagocītu baktericīdās funkcijas indikators un ļauj novērtēt to spēju uz skābekļa atkarību. Kad šis nogalināšanas mehānisms ir aktivizēts, tiek aktivizēts NADPH oksidāzes enzīms, kas izraisa reaktīvo skābekļa sugu parādīšanos fagocītos. Šādu vielu izdalīšanos šūnā sauc par skābekļa (elpošanas) sprādzienu, ko var reģistrēt, izmantojot NBT testu. Šā testa formulējumā fagocītiem pievieno nitrozīna tetrazolija vielu, tā absorbējas šūnā un reaktīvo skābekļa sugu klātbūtnē pārvēršas tumšzilā krāsā diformazāns. Jo vairāk tumšzilās granulas tiek piestiprinātas pie virsmas vai fagocītu iekšpusē, jo veidojas aktīvākas skābekļa formas, jo vairāk skābekļa atkarīgs no skābekļa.

NBT tests ir noteikts divās versijās: spontāni un inducēti. Uzstādot spontānu NBT testu, fagocīti tiek kultivēti NST klātbūtnē bez iepriekšējas šūnu aktivācijas, veicot inducēto NBT testu, barotnei pievieno fagocītu reakcijas aktivitāti. NBT testa iestatīšana divos variantos ļauj aprēķināt šūnu funkcionālo rezervi, kas ir starpība starp inducēto diformazānu pozitīvo šūnu skaitu (intensitāti) un spontānu pozitīvo šūnu skaitu (intensitāti). Inducētā NBT testa vērtības raksturo fagocītu šūnu aktivitāti antigēnu stimulatora klātbūtnē, un tās tiek uzskatītas par kritēriju to gatavībai pilnīgai fagocitozei. Spontānais NBT tests ļauj novērtēt neaktivētu fagocītu skābekļa atkarīgo nogalināšanas mehānismu aktivācijas pakāpi. Tā raksturo intracelulāro mikrobicīdu sistēmu aktivācijas pakāpi.

Lai izveidotu spontānu NBT testu, 0,1 ml asiņu pievieno 0,05 ml 0,2% NBT šķīduma kālija fosfāta buferšķīdumā (0,1, pH 7,3) un 0,05 ml tā paša bufera. Paralēli tiek ņemts paraugs, lai ņemtu vērā inducēto NBT testu, kurā 0,05 ml buferšķīduma vietā tiek pievienots tāds pats tilpums fagocītu aktivatora (piemēram, pirogēns pie koncentrācijas 50 μg / ml). Reakcijas maisījumu termostata ūdens vannā 37 ° C temperatūrā (30–60 min). Sagatavo vidēja blīvuma uztriepes, žāvē gaisā un piestiprina etilspirta vai Nikiforova maisījumā (20 min), pēc tam krāso ar neitrāla sarkana ūdens šķīdumu (0,1%, 1 min.)

Pēc reakcijas asins uztriepes tiek iegremdētas mikroskopā (100 × objektīvs, 10 × okulārs). No 100 šūnām tiek skaitīts aktivēto neitrofilu (DAN,%), kas satur diformazāna granulas, proporcija. Atkarībā no šūnās nogulsnētā difrformazāna daudzuma, to aktivitāte tiek novērtēta patvaļīgās vienībās, un tiek aprēķināts neitrofilo aktivācijas indekss (IAN, izmantotās vienības):

kur ir H_Neg. - to šūnu skaits, kurās nav diformazāna granulu;

H₁ - to šūnu skaits, kurās diformazāna nogulšņu platība ir mazāka par 1/3 no kodola laukuma;

H₂ - to šūnu skaits, kurās diformazāna nogulsnes aizņem no 1/3 līdz visam kodola lielumam;

H₃ - to šūnu skaits, kurās diformazāna nogulsnes aizņem lielāku kodola laukumu.

Mobilizācijas koeficienta (KM) atvasināšana saskaņā ar šādu formulu: