B hepatīta PCR

Mūsdienīgu anti-hepatīta B (HBV) medikamentu pieejamība ar skaidriem norādījumiem par to ievadīšanu prasa precīzu un ātru diagnozes pārbaudi. Tomēr sakarā ar ierobežotajiem klīniskajiem datiem slimības pirmajās nedēļās un ierobežotām imunoloģiskās analīzes metodēm diagnozes ātrums samazinās.

Anti-HBc IgM, HBsAg, anti-HBc, HBeAg, anti-HBe marķieru klātbūtne ļauj apstiprināt HBV vai noteikt iepriekšējās slimības faktu. Bet ir iespējams noteikt aktīvo vīrusu daļiņu klātbūtni asinīs un skaitīt to skaitu pētījuma laikā, izmantojot PCR - kvantitatīvu reālā laika testu B hepatīta noteikšanai. Metode, salīdzinot ar ELISA diagnostikas metodēm, atrisina diagnostikas problēmas un ļauj prognozēt slimības gaitu, saņemot pretvīrusu zāles.

Slimību diagnostikas pamati

B hepatīta diagnostika balstās uz klīnisko izpausmju, fermentu imunoloģiskās analīzes un instrumentālo pētījumu metožu novērtējumu. Slimība notiek akūtajā fāzē pēc inkubācijas perioda un, atkarībā no infekcijas devas un ārstēšanas efektivitātes, nonāk hroniskā stadijā. Galvenais ārstēšanas mērķis ir novērst hronizāciju, tas ir, visu vīrusu daļiņu izvadīšanu no asinīm. Slimības klīniskā gaita ir izārstēt bez turpmākās virēmijas.

Infekcijas novēršanas fakts jāapliecina ar kvantitatīvu pētījumu metodi.

Tā kā jebkura kvalitatīva enzīma imūnanalīze ļauj diagnosticēt HBV netieši, tas nozīmē, ka tā neuzrāda patogēna klātbūtni ķermeņa iekšējā vidē, bet raksturo imūnās atbildes reakciju uz infekciju, terapijas efektivitātes uzraudzību un izārstēšanas faktu ir grūti pierādīt. Tādēļ pacientam ar B hepatītu vai diagnosticēšanas kritēriju klātbūtni tā labā būtu jāveic polimerāzes ķēdes reakcija, lai noteiktu vīrusu daļiņu skaitu asinīs. Diagnostikas ātrums ir infekcijas DNS kopiju trūkums.

Diagnostikas metodes apraksts

Ļoti jutīga hepatīta B PCR diagnozes metode pieder ģenētiski modificētu molekulāro bioloģisko pētījumu kategorijai. Caur to nosaka vīrusa DNS daudzums pacienta bioloģiskajā materiālā un pieļaujamā likme. Saskaņā ar iegūtajiem rezultātiem tiek noteikts vīrusa daļiņu skaits uz tilpuma vienību. Diagnostikas testa materiāls ir pacienta venozā asinis. Tukšā dūšā ir vēlams uzņemties devu, jo chyle serums var ietekmēt pētījuma rezultātu.

Iegūtie rezultāti jāiesniedz ārstam turpmākās taktikas interpretēšanai un noteikšanai. Neatkarīga dekodēšana neatspoguļo diagnostisko vērtību.

Ar PCR metodi iegūto vīrusu daļiņu skaita rezultāta nozīme pārsniedz fermentu imūnanalīzes vērtību. Tā kā reālā laika analīze liecina par slimības izraisītāja klātbūtni asinīs, tā informācijas saturs ir lielāks nekā citi. Ja ELISA norāda tikai uz antivielu klātbūtni, kas novērota no inkubācijas perioda 4 nedēļām un ilgst vairāk nekā 8 nedēļas pēc vīrusa izvadīšanas no asinīm, tad polimerāzes ķēdes reakcija skaidri apstiprina aktīvo slimības gaitu vai tā izārstēšanu, raksturo noteiktās terapijas dinamiku.

Polimerāzes ķēdes reakcija ar patogēnu daļiņu kvantitatīvu noteikšanu atrisina diagnostikas jautājumus, kas atbalsta ārstēšanas pārtraukšanu reģenerācijas vai turpinošās terapijas dēļ, jo tas nav efektīvs. Metode ir pēc iespējas specifiska HBV vīrusa gadījumā un atšķiras ar pieņemamu kļūdu.

Indikācijas un darbības mērķi

B hepatīta kvantitatīvā analīze ir ticamākā un ļauj apstiprināt datus, kas iegūti ar ELISA metodēm. Viņš tiek iecelts, kad:

1. iegūt pozitīvu ELISA diagnostisko rezultātu;
2. ārstējot pacientu ar diagnosticētu vīrusu aknu bojājumu diagnozi;
3. hepatīta jauktas etioloģijas diagnostikā;
4. ja nepieciešams, noteikt pacienta vīrusu slodzi.

Tā kā infekcijas slimību speciālista praksē fermentu imūnanalīzes metodi plaši izmanto, daži pacienti ar vieglu slimību var tikt ārstēti, neņemot vērā vīrusu slodzi. Bet PCR parasti tiek uzskatīts par diagnostikas hepatoloģijā “zelta standartu”, jo tā rezultāta unikāluma dēļ tas novērš vairākus organizatoriskus jautājumus. Tādēļ pacienta virzībai kvantitatīvai analīzei ir šādi mērķi:

• iegūt datus par vīrusu daļiņu skaitu pacienta asinīs;
• akūta hepatīta kursa apstiprināšana un savlaicīga hroniskas slimības pārbaude;
• pastāvīga vīrusa nesēju atklāšana ar pozitīviem ELISA testiem, to virēmijas uzraudzība;
• pieņemt lēmumu par pretvīrusu terapijas iecelšanu, tās kombināciju un izbeigšanu.

Nozīmīgākais mērķis kvantitatīva PCR testa piemērošanai HBV noteikšanai ir identificēt iespējamās ārstēšanas kombinācijas. Augstas vīrusu slodzes gadījumā analīzes rezultāts dod speciālistam iespēju turpināt zāļu kombināciju. Terapijas laikā ir viegli noteikt paredzētās farmakoloģiskās ārstēšanas efektivitāti, pamatojoties uz PCR rezultātiem. Vadoties tikai ar imunoloģiskās analīzes metožu datiem, nav iespējams laicīgi noteikt ārstēšanas faktu un tā pašreizējo efektivitāti. Tādēļ kvantitatīvs reālā laika tests ir nepieciešama analīze pirms akūtas hepatīta, latentā vīrusa infekcijas ar augstu virēmiju un hronisku HBV ārstēšanu.

Kvantitatīvo PCR testa rezultātu interpretācija

Kvantitatīvā PCR testa rezultātu interpretāciju veic pacienta ārstējošais ārsts. Ir nepieciešams novērtēt diagnostisko indikatoru un noteikt terapeitisko taktiku.

Standarta analizators spēj radīt kvantitatīvu rādītāju, kas atspoguļo vīrusa DNS kopiju skaitu pētītajā venozajā asinīs. Mērvienības - kopijas / ml, SV / ml (kopijas uz mililitru, starptautiskās vienības mililitrā). Rezultātu interpretācija sniegta tabulā, norādot dažādas mērvienības.

B hepatīta PCR veidi un rezultātu interpretācija

Polimerāzes ķēdes reakcija ir asins analīzes veids, kas var precīzi noteikt B hepatīta vīrusu, un šīs metodes īpašība ir tā, ka tā spēj uzrādīt HBV agrīnā stadijā - vienu mēnesi pēc inficēšanās, bet konkrēts antigēns tiek konstatēts pacientam tikai pēc 2 mēnešiem.. PCR var atklāt ne tikai normālu DNS vīrusu, bet arī mutantus celmus, kas nav redzami.

Dekodējot B hepatīta PCR, rezultātus salīdzina ar standarta vērtībām. Pamatojoties uz to, izdarīti secinājumi par slimības esamību (pozitīvs rezultāts), vīrusa koncentrāciju (aktivitāti) vai slimības neesamību (negatīvs rezultāts). Datu apstrāde ir 2 nedēļas.

Vīrusu hepatīta B PCR veidi

B hepatīta ārstēšanai ir paredzēti divi diagnostikas veidi. Augstas kvalitātes PCR ļauj ar 100% precizitāti noteikt, vai HBV ir asinīs. Kvantitatīvais PCR parāda vīrusa aktivitāti, tas ir, cik daudz HBV DNS ir 1 ml asins.

Augstas kvalitātes PCR un tā interpretācija

Asins analīzes par hepatītu B ar PCR var noteikt tikai DNS fragmentu klātbūtni. Iecelts gadījumā, ja pacientam ir aizdomas par HBV infekciju (HBV) vai ja citas diagnostikas metodes, piemēram, seroloģiskie testi, nesniedz skaidru atbildi. Rezultātu dekodēšana, veicot kvalitatīvu analīzi, ir ļoti vienkārša:

• negatīvs rezultāts - nav vīrusa;
• pozitīvs rezultāts - atklāts vīruss.

Augstas kvalitātes PCR mērķis ir apstiprināt vai liegt B hepatīta vīrusa klātbūtni, kā arī veikt agrīnu diagnozi. Ja HBV konstatē 1-2 nedēļu laikā pēc infekcijas, ārstēšana būs pēc iespējas efektīvāka. Aktīvi attīstoties HBV 2 mēnešus un ilgāk, slimība kļūst hroniska un to nevar pilnībā izārstēt.

Gadījumā, ja hepatīta augstas kvalitātes PCR norāda vīrusa klātbūtne, nākamais solis ir veikt kvantitatīvu diagnozi.

Kvantitatīvais PCR

Lai efektīvi ārstētu vai novērtētu terapijas rezultātus, nepietiek ar to, ka pacientam ir HBV. Ir nepieciešams noteikt B hepatīta vīrusa DNS vērtību 1 ml asinīs, tas ir, vīrusa slodzi uz ķermeņa. Šis hepatīta B PCR veids tiek veikts šādos gadījumos:

1. Pirms ārstēšanas izrakstīšanas.
2. Novērtēt terapijas efektivitāti.
3. Noteikt vīrusu rezistences attīstību pret lietotajām zālēm.
4. Lai noteiktu stadiju, kurā slimība atrodas.

Vīrusa mērvienība ir starptautiskas vienības (SV / ml) vai DNS kopiju skaits / ml, tas ir, DNS fragmentu skaits uz 1 ml asins. Attiecība starp abām vienībām ir atkarīga no izvēlētās testa sistēmas un svārstās no 2 līdz 7 kopijām / ml 1 SV / ml. Ja sistēma nav zināma, reklāmguvumam tiek izmantota vidējā vērtība:

1 SV / ml = 5 kopijas / ml

Ja kvantitatīvā analīze tiek veikta nekavējoties, slimības diagnozes robežvērtība ir 75 SV / ml. Ja rezultāts pārsniedz šo rādītāju, tiek veikta HBV diagnoze, zemāk - HBV nav konstatēts.

Kvantitatīvās PCR apstrāde

B hepatīta gadījumā PCR standarti ir šādas vīrusu slodzes (virēmijas) vērtības, kopijas / ml:

• 10 ^ 5 kopijas / ml. Ja ar lielu vīrusu aktivitāti ALT līmenis palielinās biežāk 2 reizes sešos mēnešos, tad nekavējoties tiek noteikta pretvīrusu terapija.

Lai noskaidrotu, kā DNS hepatīts rīkosies hroniskuma ziņā, ti, pāreja uz hronisku formu no akūta, tiek izmantoti arī PCR diagnostikas rezultāti:

• HBV DNS ar 2 x 10 ^ 6 kopijām / ml nozīmē, ka slimības hroniskās formas iegūšana ir neizbēgama.

Sagatavošanās aptaujai

Lai noteiktu HBV klātbūtni, izmantojot PCR, asinis ņem no vēnas. Procedūra vienmēr tiek veikta stingri tukšā dūšā, un vislabāk ir nokļūt laboratorijā no rīta, kad dabiskais atpūtas laiks ir 8 stundas. Lai pārbaudījuma rezultāti būtu pareizi, ir nepieciešams iepriekš zināt, kā pareizi sagatavoties klīnikai. Papildu pasākumi ir šādi:

1. Atteikšanās no taukainiem pārtikas produktiem, smēķēšana, alkohols un sports 12 stundas pirms procedūras.
2. Atpūtieties 20 minūtes tieši pirms asins nodošanas.
3. Pirms procedūras uzsākšanas, māsa jābrīdina par lietotajām zālēm.

Uzmanību! Ja diagnoze tiek veikta bērnam līdz 5 gadu vecumam, tad pusstundu pirms procedūras viņš dzer 1 glāzi vārīta ūdens ik pēc 10 minūtēm.

Apkopojot

Līdz šim PCR diagnostika B hepatīta noteikšanai ir visprecīzākā metode. Šī metode ļauj jums redzēt slēptās un mutācijas formas slimību, identificēt slimību pirmajās nedēļās pēc infekcijas un attiecīgi veikt efektīvu ārstēšanu. Atkarībā no situācijas tiek veikts kvalitatīvais vai kvantitatīvais PCR, kura mērķis ir noteikt HBV un noteikt tās aktivitāti. Lai pārbaudītu, jums ir jāsazinās ar virologu, infekcijas slimību speciālistu vai hepatologu.

B hepatīta DNS un PCR

DNS testi un hepatīta B vīrusa PCR ir jutīgākie testi, kas nosaka molekulārās DNS pēdas aknās, kas nosaka vīrusa klātbūtni. Metodes būtība sastāv no DNS slimības fragmenta kopēšanas, kas pieder pie slimības izraisītāja.

B hepatīta tipa PCR ir ārējā ķīmiskā reaģenta un pētāmā bioloģiskā materiāla polimerāzes ķēdes reakcija, kuras mērķis ir noteikt vīrusa DNS molekulas asinīs un to kvantitatīvos rādītājus uz tilpuma vienību. Analīze tiek piešķirta šādos gadījumos:

• ja pacientam ir B hepatīta pazīmes;
• jauktās hepatīta diagnostikas laikā;
• lai precizētu terapijas efektivitāti.

PCR analīzei tiek savākta vēnu asinis. Pirms pētījuma jums vajadzētu atturēties no ēšanas apmēram 8 stundas.

Parastu rezultātu, kad DNS konstatē vīrusā, uzskata par “nav konstatēts”. Tas nozīmē, ka vīruss nav asinīs vai tā saturs ir nenozīmīgs. Galīgo diagnozi var izdarīt tikai speciālists, pamatojoties uz B tipa hepatīta asins plazmas visaptverošu bioķīmisko un imunoloģisko analīzi. Pašārstēšanās ietver pārāk lielu risku.

Vēnu asins paraugu ņemšana tiek veikta PCR analīzei.

PCR metode ļauj noteikt patogēna DNS pat ar minimālu klātbūtni izvēlētajā asins paraugā. Turklāt analīze ļauj atklāt antigēnus, kas jau ir izstrādāti vīrusam. Katrs no antigēniem norāda konkrētu slimības stadiju:

• HBsAg - vīruss pašlaik ir klāt.
• Anti-HBcor - patogēns pašlaik nav sastopams, bet agrāk.
• Anti-HBs - asinīs ir antivielas pret B hepatītu (kā opcija - herpes, HIV, hlamīdijas, mikoplazmoze, kandidoze, tuberkuloze, ērču encefalīts un daudzas citas slimības).

Patoloģija un tās pazīmes

B hepatīts vai HBV ir vīrusu infekcija, kas ietekmē aknu šūnas. Tas ir bīstami ne tikai ar tiešu rīcību uz orgāna parenhīmu, kas vājina barjeras funkciju un vispārējo imunitāti. Ir iespējamas nopietnākas sekas, piemēram, aknu ciroze un ļaundabīgo audzēju rašanās.

HBV pārnēsā caur hepatīta inficētas personas asinīm, viņa ekskrementiem, saskarē ar gļotādām, īpaši dzimumakta laikā, ādas bojājumiem, caur nesterilām šļircēm asins pārliešanas laikā vai vēdera operāciju laikā. Jaundzimušo māte var būt inficēta, pieskaroties plaisām viņas sprauslās.

B hepatītu raksturo šādi simptomi:

Neparasti nogurums

• palielinot nogurumu pie zemām slodzēm;
• neparasts nogurums;
• smagums pareizajā hipohondrijā;
• samazināta ēstgriba, slikta dūša;
• ādas dzeltenums, acu sklēra;
• spilgti izkārnījumi;
• tumšs urīns;
• sāpes locītavās.

Inkubācijas periods, pēc kura sāk parādīties šie simptomi, ir no viena līdz sešiem mēnešiem. Tas ir vīrusu šūnu uzkrāšanās periods aknu asinsritē. Kad to koncentrācija sasniedz kritisko masu, vīruss saplūst caur hepatocītu membrānām un turpina vairoties šūnās. Tā rezultātā aknu šūnas mirst, attīstās ciroze, kas, ja nav piemērotu terapeitisku pasākumu, izraisa letālu iznākumu. Savlaicīga asins analīze PCR un B hepatīta DNS palīdz izvairīties no negatīviem.

PCR indikācijas ir šādas:

• pozitīvs DNS tests, kas apstiprina B hepatīta diagnozi;
• akūts un hronisks hepatīts;
• jaukts hepatīts;
• vīrusa kvantitatīva noteikšana asins serumā;
• efektīvas terapijas taktikas attīstība.

Sagatavošanās analīzei

Sagatavošanu diagnostikai, izmantojot PCR, nosaka biomateriāla veids. Tātad asinis un urīns ziedo tikai no rīta, tukšā dūšā. Arī no urogenitālās zonas tiek ņemti uztriepes un skrāpējumi. Vienīgais ierobežojums sievietēm ir menstruācijas. Sekss ir ierobežots abiem dzimumiem pētījuma priekšvakarā.

PCR rezultātus var uzskatīt par uzticamiem tikai tad, ja pacients ir pienācīgi sagatavojies procedūrai. Šis pētījums ietver šādus nosacījumus:

• pilns ar garīgu komfortu, nav uztraukuma. Lai nodrošinātu, ka šo analīzi var veikt pat mājās. Ir nepieciešams tikai piezvanīt ārstam ar atbilstošu aprīkojumu;
• atturēties no pārtikas, alkohola, smēķēšanas, fiziskās aktivitātes vismaz 8-12 stundas pirms analīzes, pretējā gadījumā pētniecības dati tiks izkropļoti;
• 15-20 minūšu pilnīga relaksācija pirms asins savākšanas;
• zāļu lietošanas pārtraukšana (ja tas nav iespējams, jābrīdina laboratorija);
• bērni, kas jaunāki par pieciem gadiem, pusstundu pirms analīzes ir jāsniedz vārīta ūdens, lai dzert mazās porcijās.

Kā tiek veikts pētījums

PCR analīze balstās uz molekulārās bioloģijas principiem. Tie ietver īpašu enzīmu izmantošanu, kas šķeļ un replikē asins DNS infekcijas izraisītāja DNS un RNS daļas. Pēc šīs operācijas iegūtos paraugus identificē ar laboratorijā pieejamo datu bāzi. Tajā pašā laikā tiek atklāts infekcijas veids un koncentrācija patogēna asinīs.

Pētījumam tiek izmantots pastiprinātājs - termostats, kas spēj sildīt un dzesēt caurules ar biomateriālu. Tas ir nepieciešams replikācijas procesu aktivizēšanai. Analīzes precizitāte ir atkarīga no temperatūras parametru precizitātes.

Dekodēšanas rezultāti

Pozitīvs rezultāts pacientam ir laboratorijas secinājums “nav konstatēts”. Tas nozīmē, ka asinīs nav hepatīta B DNS, un skaitliskā izteiksmē tas ir aptuveni 120 SV / ml vai 200 kopijas vienā un tajā pašā asins tilpuma vienībā. Šī vērtība ir norma. Prasība attiecībā uz bioloģisko materiālu ir tā, ka tā nedrīkst būt piesārņota.

Citu analīžu rezultātu dekodēšana ļauj veikt šādas diagnozes:

• B hepatīta DNS koncentrācija asinīs ir vairāk nekā 200 kopiju, bet zem kritiskā līmeņa. Nav nopietnas patoloģijas.
• Virēmija vieglā formā, līdz 500 kopijām uz ml. Ārstēšanas izvēle ir atkarīga no aknu biopsijas rādītājiem un tās funkciju pasliktināšanās pakāpes.
• Palielināta vīrusa koncentrācija (vairāk nekā 500 kopiju / ml). Iekaisuma process aktīvajā fāzē un nepieciešama intensīva pretvīrusu terapija.
• Maksimālā vīrusu slodze (vairāk nekā 800 kopiju uz ml). Terapeitiskie pasākumi tiek izstrādāti, pamatojoties uz pacienta stāvokli, un tie ir pilnībā vērsti uz maksimālu iespējamo uzlabošanos.

Pacientam labs rezultāts ir secinājums "nav atklāts"

B hepatīta DNS satura kvantitatīvo rādītāju noteikšana PCR laikā ir pamats terapijas kursa izvēlei. Pēc trim vai sešiem mēnešiem testi tiek veikti atkārtoti, lai pārbaudītu pretvīrusu terapijas efektivitāti.

Polimerāzes ķēdes reakcijas funkcija

PCR metodē tiek izmantotas divas vīrusam piederošās DNS noteikšanas pieejas: kvalitatīvs un kvantitatīvs.

Kvalitatīva pieeja apstiprina vai liedz B hepatīta klātbūtni. PCR tiek pieprasīts pēc pacienta pieprasījuma, ja ir aizdomas, ka viņš ir inficēts ar HBV infekciju vai ja agrīna diagnoze nesniedz nepārprotamus rezultātus citā veidā.

Ja B hepatīta vīrusu var konstatēt ne vēlāk kā divas nedēļas pēc tās ieiešanas organismā, visticamāk ir pozitīva ārstēšanas prognoze. Nākotnē slimība sāks progresēt. Pēc aptuveni diviem mēnešiem viņa ieies hroniskā fāzē. Pilnīga izārstēšana šajā gadījumā kļūs neiespējama.

Kvantitatīvu pieeju PCR izmanto tikai tad, ja tiek atklāts vīruss. Viņš novērtē:

• specifiska vīrusu slodze uz aknām;
• slimības progresēšanas intensitāte;
• rezistence pret pretvīrusu zālēm;
• ārstēšanas efektivitāti.

Šiem rādītājiem ir tieša praktiska nozīme. Īpaši kvantitatīvs DNS rādītājs. Prognoze B hepatīta akūtajā fāzē ir atkarīga no vīrusa koncentrācijas aknu asinsritē, līdz ar to neliela vīrusu šūnu koncentrācija gandrīz pilnībā izslēdz akūta vai hroniska hepatīta pāreju. Šādi pacienti nerada draudus citiem. Augsta vīrusu slodze veicina patoloģiskā procesa hronizāciju un hepatīta infekcijas iespēju cilvēkiem, kas saskaras ar pacientu.

Pastāv arī saikne starp vīrusu gēnu koncentrāciju asinīs un aknu cirozes deģenerāciju un parenhīmas vēža rašanos.

PCR testi palīdz ārstam noteikt vīrusu nesējus.

Pretvīrusu terapijas efektivitāti nosaka hepatīta B DNS koncentrācijas samazināšanās pakāpe aknu cirkulācijā. Pietiekams rezultāts ir vīrusu slodzes samazināšana par 1-2 reizes ar intensīvu ārstēšanu no trim mēnešiem līdz sešiem mēnešiem. Zemākas likmes prasa mainīt ārstēšanu.

Patoloģijas attīstības prognoze un atbilstošas ​​terapijas iecelšana nāk no:

• kvantitatīvais aknu vīrusa DNS daudzums asins serumā;
• saistītie bioķīmiskie parametri (piemēram, leikocītu līmenis asinīs un bilirubīna saturā);
• vīrusu infekcijas marķieri;
• aknu biopsijas rezultāti.

Vispārējas nozīmes PCR

Analīze ar polimerāzes ķēdes reakcijas palīdzību palīdz ārstam:

• noteikt vīrusa nesējus;
• prognozēt B tipa hepatīta attīstību;
• pārliecinieties, ka slimība kļūst hroniska;
• pārraudzīt vīrusa aktivitāti visos attīstības posmos;
• identificēt B hepatīta mutācijas un slēptos celmus;
• izvērtēt vīrusa ārstēšanas efektivitāti, izvēloties noteiktu taktiku un nepietiekama panākuma gadījumā to mainot.

Metodes priekšrocības

Atšķirībā no citiem B hepatīta diagnostikas testiem, PCR ir:

PCR analīze ir ārkārtīgi jutīga.

1. Ārkārtas jutīgums. Šī metode ļauj pētniekam atklāt slimības izraisītāju, pat ja tās DNS molekulu koncentrācija asinīs ir minimāla. Tas ļauj veikt profilakses un ārstnieciskus pasākumus slimības agrīnā stadijā, kad acīmredzot tas vēl nav izteikts ar jebkādiem simptomiem.
2. Plašas iespējas. PCR var atklāt ne tikai vīrusu hepatīta B izraisītāju, bet arī vairākas citas patoloģijas.
3. Pieeju universālums. Pētījuma biomateriāli var būt asinis, siekalas, gļotādas šūnas un āda.
4. Efektivitāte. Secinājums būs gatavs tieši vienu dienu pēc asins paraugu ņemšanas (pašas analīzes rezultāts tiek iegūts ne vēlāk kā 7 stundas).
5. Uzticamība. Visos PCR metodes apstākļos nekad neparādās nepatiesus datus.
6. Cenu pieejamības pētījums. Pēc izmaksām PCR ir tikai nedaudz augstāks nekā parastie testi, kas izmanto asinis kā biomateriālu.

Vienīgās pētniecības izmaksas ir tās tehnoloģiskā sarežģītība. Lai nodrošinātu augstas kvalitātes PCR ieviešanu, ir nepieciešams ļoti tīrs biomateriāls, moderns aprīkojums un labi apmācīts personāls. Ieteicams pieteikties diagnostikai, izmantojot šo metodi, specializētām laboratorijām.

Vīrusu B hepatīts attiecas uz slimībām, kuru pilnīga izārstēšana ir iespējama tikai agrīnā attīstības stadijā. Identificējiet slimību šajā fāzē, palīdzot paaugstināt jutību pret PCR. Pirmie simptomi, kas izraisa aizdomas par vīrusa bojājumiem, ir iemesls konsultēties ar speciālistu. Ja diagnoze ir apstiprināta, ārstēšana jāsāk nekavējoties. Tas uzlabos prognozes un palielinās varbūtību atbalstīt aknas veselīgā stāvoklī daudzus gadus.

B hepatīta asins analīzes atšifrēšana

B hepatīts ir viena no mūsdienu bīstamākajām slimībām.

To izraisa vīruss, kas nonāk organismā, kad asinis nonāk saskarē ar inficētiem bioloģiskiem materiāliem, ieskaitot tos, kas paliek manikīra piederumos, medicīnas instrumenti, tetovēšanas mašīnas, kas nav dezinficētas pareizi. Vīruss var tikt pārraidīts arī ar seksuālo kontaktu palīdzību.

B hepatītu analizē, lai diagnosticētu slimību, ņemot pacienta asinis.

Infekcija notiek seksuālā un vietējā ceļā, izplatīšanās veids ir hematogēns (caur asinīm). Inficējoties vīruss nonāk hepatocītos (aknu šūnās), kas tiek ražotas nākotnē. Ar asinsriti slimība strauji izplatās visā organismā. Vīrusu B (HBV) raksturo augsta izturība pret temperatūras un skābes iedarbību, un sešus mēnešus spēj saglabāt tās kaitīgās īpašības.

Kādas asins analīzes jums ir par B hepatītu?

Ja B hepatīts parādīja pirmos simptomus, pirms terapijas un ārstēšanas uzsākšanas jāveic testi. Asins analīzes ir droša metode hepatīta infekcijas uzstādīšanai. Veikts laboratorijā. B hepatīta testa materiāls tiek ievadīts tukšā dūšā: no pēdējās ēdienreizes jāiet vismaz 8 stundas.

Lai atklātu B hepatīta vīrusu asinīs, tiek izmantoti trīs veidu testi, kas raksturo vīrusa klātbūtni asinīs:

• analizējot HBV DNS klātbūtni materiālā, pētot polimerāzes ķēdes reakciju;
• kvalitatīvs pētījums par anti-HBc IgG proteīna un HBsAg antigēna klātbūtni (atrodams veselos, inficētos un slimos);

• analīze HBeAg un Anti-HBc IgM proteīnu noteikšanai (raksturo slimības pasliktināšanos).

Pilnības labad ieteicams vienlaikus veikt pētījumus par vairākiem marķieriem.

B hepatīta imunoloģiskie testi

Visbiežāk B hepatīta testi ir imunoloģiski. To būtība ir noteikt antivielas asinīs, ko rada ķermenis vai aknas. Paraugi ir kvalitatīvi un kvantitatīvi. B hepatīta testi un transkripti parasti satur informāciju par vairākām raksturīgām olbaltumvielām. Testa laikā tiek pārbaudītas šādas antivielas:

Tas notiek agrīnās infekcijas stadijās pirms klīnisko pazīmju rašanās.

Pozitīvs marķieris norāda uz vīrusa klātbūtni, bet tas ir atrodams arī pilnīgi veseliem cilvēkiem. Ja asinīs ir mazāk nekā 0,05 SV / ml, rezultāts tiek uzskatīts par negatīvu. Ja antivielas koncentrācija ir lielāka, analīzi uzskata par pozitīvu.

Tas ir atrodams gandrīz katrā inficētajā pacientā. Rādītāju saglabāšana augstā līmenī var liecināt par slimības pāreju uz hronisku kursa formu. Pozitīvs marķieris norāda uz slimības klātbūtni paasinājuma periodā, ilgstošu atveseļošanos. HBeAg ir ļoti slikta zīme. Pacients ir ļoti lipīgs. Parasti asinīs proteīns netiek konstatēts.

Ir divu veidu anti-HBc antivielas: IgG un IgM. IgM klātbūtne asinīs liecina par akūtās formas gaitu, pacienta augsto inficētspēju un slimības pererohoda iespējamību hroniskā formā. Parasti IgM klātbūtne nav atļauta. IgG ir labvēlīgs rādītājs. Marķieris norāda, ka organisms veido imunitāti pret B hepatītu.

Ja asinīs tiek konstatēts marķieris, var izdarīt secinājumus par labvēlīgo slimības gaitu un aizsargājošās imunitātes veidošanos pacientam.

• Anti-HBs.

Marķieris norāda uz atveseļošanos un imunitātes veidošanos.

HBV DNS noteikšana ar PCR

Lai pārbaudītu un noteiktu B hepatīta diagnozi asinīs, izmanto PCR metodi. Veids, kādā tiek uzskatīta polimerāzes ķēdes reakcija, ir visjaunākā slimības atklāšanas jomā.

Galīgais dekodēšana parāda, vai aknu šūnās ir patogēna patogēno gēnu klātbūtnes pēdas.

Ja pētījuma laikā tiek ievēroti visi principi, rezultāts ir absolūti precīzs. Šo metodi izmanto diagnozei, ko izmanto ārstēšanas procesā un pretvīrusu terapijā.

1. Augstas kvalitātes PCR kopumam ir tikai divas nozīmes: “atklāts” un “nav atklāts”. Procedūru veic katram pacientam, kam ir aizdomas par hepatītu. Ar PCR testa vidējo jutību diapazonā no 10 līdz 500 SV / ml ar zemu vīrusa DNS līmeni asinīs, netiks konstatēts gēnu materiāls.
2. Kvantitatīvais PCR. Atšķirībā no kvalitatīvā, tas norāda ne tikai uz B hepatītu. Kvantitatīvā analīze norāda, cik lielā mērā veselas personas norma skaitliskā izteiksmē ir tālu no pacienta rādītājiem. Šī metode ļauj novērtēt slimības stadiju un noteikt ārstēšanu. PCR testa jutīgums kvantitatīvā secībā ir augstāks nekā kvalitatīvajā metodē. Pamats ir konstatētās DNS skaits, kas izteikts kopijās uz mililitru vai SV / ml.

Turklāt kvantitatīvā PCR sniedz ieskatu par ārstēšanas ietekmi un izvēlētās terapijas pareizību. Atkarībā no vīrusa gēnu materiāla daudzuma var pieņemt lēmumu saīsināt ārstēšanas ilgumu vai, otrkārt, paplašināt un stiprināt to.

B hepatīta asins analīzes

Lai iegūtu pilnīgu klīnisko priekšstatu par slimības gaitu, nepieciešama bioķīmiskās analīzes metode. Šī diagnostikas metode sniedz izpratni par iekšējo orgānu (aknu, nieru, žultspūšļa, vairogdziedzera uc) darbu. Dekodēšana sniedz izpratni par vielmaiņas ātrumu organismā, iespējamo metabolisma patoloģiju. Detalizēti rādītāji liecina par vitamīnu, makroelementu un minerālvielu trūkumu, kas nepieciešams cilvēku veselībai un dzīvībai.

Jūs varat veikt hepatīta testu jebkurā citā diagnostikas centrā (Invitro, Gemotest uc). Biogrāfisko asins analīžu veikšana B hepatīta noteikšanai ietver šādus komponentus.

ALT (AlAt) fermenta kvantitatīvā analīze

Šo enzīmu visbiežāk novēro paaugstinātās koncentrācijās akūtu un hronisku hepatītu. Viela atrodas aknu šūnās, un ar orgānu bojājumiem caur asinsriti nonāk asinsvados.

Vīrusa slimības laikā asins daudzums un koncentrācija asinīs nepārtraukti mainās, tāpēc pētījumi tiek veikti vismaz reizi ceturksnī. ALT atspoguļo ne tikai hepatīta vīrusa aktivitāti, bet arī to izraisīto traucējumu pakāpi aknās. ALT līmenis palielinās, palielinoties aknu izcelsmes toksisku vielu daudzumam un vīrusa klātbūtnē.

AST-enzīmu kvantitatīvā analīze

Olbaltumvielas ir svarīgāko cilvēka orgānu sastāvdaļa: aknas, nervu audi, nieru audi, skelets un muskuļi. Enzīms ir iesaistīts svarīgāko muskuļu - sirds - veidošanā. Augsts AST pacientiem ar B hepatītu var liecināt par aknu fibrozi. Līdzīga situācija rodas, ja alkohola, narkotiku vai citu toksisku kaitējumu aknu šūnām.

Pārkaršanas rādītāji ir aknu bojājuma pazīme šūnu līmenī. Veicot diagnozi, jāņem vērā attiecība starp AST un ALT (de Rytis koeficients). Vienlaicīgs abu fermentu koncentrācijas pieaugums ir aknu nekrozes pazīme.

Bilirubīns

Viela veidojas liesā un aknās hemoglobīna sadalīšanās rezultātā to audos. Šis komponents ir daļa no žults. Ir divas olbaltumvielu frakcijas: tiešā bilirubīna (saistītā) un netiešā bilirubīna (brīva). Pieaugot saistītā bilirubīna koncentrācijai asinīs, ir lietderīgi aizdomas par hepatītu vai citiem aknu bojājumiem. Tas ir tieši saistīts ar aknu šūnu citolīzi.

Ja netiešā bilirubīna daudzums palielinās, tad, visticamāk, ir parenhīma audu vai Gilberta sindroma bojājums. Augsts bilirubīna līmenis saskaņā ar analīzes rezultātiem var būt žults kanālu aizsprostojuma sekas. Ja bilirubīna līmenis ir lielāks par 30 mikromoliem uz litru, pacients uzrāda ādas tonusu, urīns kļūst tumšs, un acu baltumi maina krāsu.

Albumīns

Šīs olbaltumvielas sintēze notiek aknās. Ja tā daudzums ir samazināts, tas liecina par fermentu sintēzes samazināšanos organismā sakarā ar smagu aknu šūnu bojājumu rašanos.

Kopējais olbaltumvielu daudzums

Ja kopējā proteīna daudzums kļūst ievērojami zemāks par pieņemto normu, tas norāda uz aknu darbības palēnināšanos.

GGT (GGTP)

Enzīmu, ko izmanto obstruktīvas dzelte un holecistīts atklāšanai. GGT līmeņa paaugstināšanās ir toksisku aknu bojājumu signāls. To var izraisīt hronisks alkoholisms un nekontrolēta narkotiku lietošana. Proteīns ir īpaši jutīgs pret toksīniem un alkoholu, un viņu ietekme strauji pieaug. Augstas GGT koncentrācijas saglabāšana asinīs ilgu laiku liecina par smagu aknu bojājumu.

Kreatinīns

Tas ir olbaltumvielu metabolisma produkts, kas notiek aknās. Straujš krituma līmenis ir signāls, ka orgāns palēninās.

Olbaltumvielu frakcijas

Olbaltumvielu frakciju līmeņa pazemināšanās ir aknu patoloģijas pazīme.

B hepatīta un vērtību dekodēšanas analīze ir normāla

B hepatīta diagnosticēšana ir rādītāju kumulatīvs pētījums. Tikai to visaptverošā analīze ļauj izdarīt secinājumus par pacienta infekciju. Apsveriet B hepatīta dekodēšanas analīzi. Salīdzinājumam - vielu daudzums asinīs.

B hepatīta PCR analīze

Hepadnaviridae ģimenes DNS vīruss ir tiešs hepatīta B izraisītājs. B hepatīta PCR analīze ļauj konstatēt inficētas DNS vīrusa klātbūtni pacienta asinīs. Pozitīva HBV DNS tipa rezultāts liecina par infekcijas klātbūtni pacienta asinīs. Jāatzīmē, ka diagnoze, izmantojot PCR analīzi, ļauj ne tikai noteikt infekcijas klātbūtni, bet arī tā kvantitatīvo slodzi un aktivitāti. Šī metode ir uzticama, precīza un reproducējama. HBV DNS kvantitatīvo noteikšanu ar qPCR var izmantot HBV terapijas efektivitātes uzraudzībai un ir noderīga, lai izprastu HBV dabisko vēsturi endēmiskā zonā.

Infekcijas process ar B hepatītu notiek, izmantojot vietējo vai seksuālo kontaktu - tiešā saskarē ar inficētām asinīm. Pēc inficēšanās vīruss nonāk aknu šūnās, kurā tā turpina aktīvo reprodukciju. Caur asinsriti patogēnas šūnas izplatījās visā ķermenī. Jāatzīmē, ka B hepatīta šūnas ir ļoti izturīgas pret skābi un augstu temperatūru. Viņš sešus mēnešus spēj saglabāt savas kaitīgās īpašības.

B hepatīta PCR veidi

Līdz šim ir noteikti divi diagnostikas veidi, ja ir aizdomas par B hepatīta vīrusa klātbūtni: kvalitatīvs PCR (ļauj noteikt ar vīrusa klātbūtnes 100% precizitāti asinīs) un kvantitatīvo PCR (ļauj noteikt vīrusa aktivitātes pakāpi).

Ja ir aizdomas par HBV infekciju, tiek noteikta augstas kvalitātes PCR vai ja citas diagnostikas metodes nav devušas skaidrus rezultātus. Šāda veida PCR analīze ir ļoti viegli atšifrējama: negatīvs (asinīs nav konstatēts vīruss), pozitīvs (vīruss konstatēts asinīs). Kvalitatīvās analīzes galvenais uzdevums ir noteikt inficēto šūnu klātbūtni slimības sākumposmā. Ja vīruss tika diagnosticēts divas nedēļas pēc iespējamās infekcijas, ārstēšanas efektivitāte būs daudz lielāka. Ja vīruss asinīs ir apmēram divi mēneši, slimība kļūst hroniska, tādēļ to nevar pilnībā izārstēt.

Ja kvalitatīva diagnoze apstiprina HBV klātbūtni asinīs, ārsts nosaka kvantitatīvu analīzi.

Kvantitatīvā analīze ļauj noteikt vīrusa attīstības aktivitāti pacienta organismā. Šāda veida PCR analīze ir piešķirta:

• noteikt slimības stadiju;
• uzraudzīt lietotās terapijas efektivitāti;
• noteikt vīrusa rezistences līmeni pret konkrētu narkotiku;
• narkotiku izvēlei.

Vīrusa kvantitatīvie rādītāji asinīs tiek mērīti SV uz mililitru vai DNS uz mililitru.

Ja ārsts nekavējoties nosaka kvantitatīvu diagnozi, nekontrolējot kvalitāti, tad ātrums ir 75 SV / ml. Ja tiek konstatētas mazākas starptautiskas vienības, rezultāts ir tāds, ka HBV netiek atklāts, kad skaitļi ir virs normālā, tiek diagnosticēts vīrusu hepatīta B klātbūtne.

Kvantitatīvās diagnozes interpretācija

Sekojoši rādītāji (kopijās / mililitros) tiek uzskatīti par normām CRP hepatīta B gadījumā: mazāk nekā 10 3 - neaktīvs vīruss; no 10 līdz 10 5 - vīruss parasti ir neaktīvs; 10 - aktīvais vīruss; 7 7 - vīruss augstā darbības posmā.

Pamatojoties uz kvantitatīvajiem rādītājiem, ar 100% precizitāti var noteikt slimības formu (nesējs, akūta vai hroniska), vīrusa reakciju uz ārstēšanu, nepieciešamību pēc papildu diagnostikas.

B hepatīta hroniskā forma ir noteikta, ja vīrusa aktivitāte ir 10,5 kopijas uz mililitru. Pārvadātājs tiek diagnosticēts, ja rādītāji ir mazāki par 10 5 kopijām mililitrā.

Ārstēšanas laikā ir nepieciešams regulāri (reizi trijos mēnešos) atkārtot kvantitatīvo diagnostiku, lai ņemtu vērā laiku, kad vīruss attīstās imunitāte pret lietotajām zālēm, un mainīt metodi. Ja visi pētījumi ir veikti pareizi un ir izvēlēta efektīva ārstēšana, atkārtota analīze (pēc trīs ārstēšanas dienām) parādīs patogēnu šūnu aktivitātes samazināšanos par vismaz astoņdesmit pieciem procentiem.

Aknu biopsiju veic tikai tad, ja sešu mēnešu ārstēšana ir parādījusi, ka ALT līmenis ir divreiz lielāks nekā normāli, un PCR diagnostika liecina par zemāku nekā 10 5 kopiju uz vienu mililitru asins.

Sagatavošanās aptaujai

Analīzei ir nepieciešamas vēnas asinis. Lai iegūtu visprecīzākos rezultātus, ir nepieciešams sagatavoties procedūrai: atteikties ņemt pārtiku vismaz astoņas stundas pirms asins savākšanas; divas dienas atteikties no narkotiku lietošanas (ir obligāti jābrīdina ārsts par zāļu lietošanu); pirms asins nodošanas jums ir jāpavada 20 minūtes atpūtas režīmā; Divpadsmit stundas pirms procedūras atdodiet sporta vingrinājumus, alkoholiskos dzērienus, smēķēšanu un ēšanas taukus.

Ir svarīgi: ja diagnoze ir nepieciešama bērnam, kas jaunāks par pieciem mēnešiem, tad viņam ir jāsniedz glāze vārīta ūdens ik pēc desmit minūtēm pirms sešdesmit minūtēm pirms asins savākšanas procedūras.

Apkopojot

Šodien hepatīta B PCR analīze ir visprecīzākā metode vīrusa diagnosticēšanai. Šī metode ļauj noteikt mutācijas un slēptās slimības formas, diagnosticēt slimību pirmajās infekcijas dienās, lai izvēlētos visefektīvāko ārstēšanu. Laboratorijas palīgs salīdzina analīzes rezultātus ar normu un pēc tam tos nonāk pie secinājuma. Dati tiek apstrādāti divu nedēļu laikā. Lai saņemtu nodošanu PCR analīzei, ir jāsazinās ar hepatologu, infekcijas slimību speciālistu vai virologu. Ir svarīgi atcerēties, ka, jo ātrāk nokļūsiet pie ārsta, jo ātrāk tiks iegūti rezultāti, jo efektīvāka būs ārstēšana.

B hepatīta PCR un tā rezultātu analīzes būtība

Vīrusu hepatīts B tiek veiksmīgi ārstēts, ja to konstatē laikā, un ir pareizi noteikts antivielu un antigēnu skaits pacienta asinīs. Ar hepatīta enzīma imūnanalīzes palīdzību ir iespējams noteikt vīrusu marķieru klātbūtni, bet tie nevar noteikt precīzu procesa stadiju.

Kvantitatīvai novērtēšanai izmantoja PCR diagnostiku. Izmantojot testu, ir iespējams skaitīt marķieru skaitu, prognozēt slimības gaitu un izārstēšanas iespējamību, izmantojot pretvīrusu zāles.

Pētījuma galvenā priekšrocība ir spēja noteikt pat minimālas vīrusa koncentrācijas, identificēt patogēnu sugas posmā.

B hepatīta diagnostika

B hepatīta vīruss ir ļoti lipīgs un izturīgs pret ārējām ietekmēm. Tā paliek aktīva pacienta asinīs vairākas nedēļas. Tādēļ katram cilvēkam ir inficēšanās risks, pat ja tiek novērota profilakse.

Lai diagnosticētu slimību, norādiet šādus pētījumus:

PCR metodes būtība

Amerikāņu ķīmiķis K.Mullis saņēma Nobela prēmiju, un joprojām tiek izmantota viņa diagnostikas metode.

PCR metodes (polimerāzes ķēdes reakcija) senči tiek uzskatīti par zinātnieku no Norvēģijas H. Kleppe. Viņš vispirms sāka veikt DNS amplifikāciju, izmantojot īsu DNS ķēdi, proti, sintētisku primer (veida kopiju).

Tomēr zinātnieks nespēja realizēt savu ideju. Līdzīgus pētījumus veica amerikāņu ķīmiķis K.Mullis, kurš 1993. gadā saņēma Nobela prēmiju par savu izgudrojumu. Kopš tā laika PCR tika izmantots paternitātes noteikšanai, ģenētisko slimību diagnosticēšanai un vīrusu atklāšanai.

Šīs reakcijas būtība ir tāda, ka ar fermentu palīdzību tiek kopēta noteikta DNS daļa. Jūs varat kopēt tikai apgabalu, kas atbilst norādītajiem parametriem, un, ja tas ir iesniegtajā paraugā. Lai sāktu reakciju, tiek izmantotas šādas sastāvdaļas:

1. Matricas DNS ar kopējamo vietu.
2. Gruntējumi, kas līdzīgi struktūrai ar DNS.
3. Polimerāze, tas ir, enzīms, kas izraisa reakciju. Tam jābūt termostabilam, tas ir, lai izturētu galējības temperatūras.
4. Risinājums ar noteiktiem parametriem, nodrošinot reakcijas gaitu.

Reakcija tiek veikta vairākos posmos:

B hepatīta noteikšanai tiek izmantoti divu veidu reakcijas: kvantitatīvs un kvalitatīvs.

Kvantitatīvais PCR

Kvantitatīvā metode nosaka HBV genoma daudzumu

Kvantitatīvais PCR ietver DNS fragmentu kopiju vienlaicīgu izveidi un molekulu skaita noteikšanu. Mērījumi tiek veikti pēc katra posma, tas ir, reālā laikā. Tas tiek panākts, izmantojot fluorescējošus zondes, kas ir iekļautas molekulu ķēdē un spīd konkrētā pētījuma laikā.

Šo metodi izmanto, lai noteiktu DNS fragmentus, kas ir hepatīta vīrusa marķieri. Izmantojot kvantitatīvo metodi, ir iespējams precīzi izolēt vīrusa genotipu. Citiem vārdiem sakot, tiek aprēķināts HBV genoma kopiju skaits uz pacienta šūnu skaitu.

Kvantitatīvā analīze sniedz atbildes uz šādiem jautājumiem:

1. Ar kādu intensitāti slimība progresē.
2. Cik efektīva ir ārstēšana.
3. Vai ir attīstījusies zāļu rezistence?

Arī kvantitatīvais mērījums ir nepieciešams hroniskas infekcijas stadijas diagnostikai. Ja DNS līmenis ir zemāks par 100 gab / ml normālā transamināžu līmenī, tad persona ir vīrusa nesējs.

Akūtajā fāzē antivielu daudzums ir daudz lielāks, pretvīrusu terapijā antivielu skaita pieaugums norāda uz zāļu rezistences attīstību, tas ir signāls, lai pielāgotu ārstēšanu.

Augstas kvalitātes PCR

Augstas kvalitātes PCR sniedz mazāk informācijas, bet var novērst infekciju.

Augstas kvalitātes PCR var noteikt tikai patogēna klātbūtni asinīs. Ja tie nav, pacients nav inficēts, ja patogēns nonāk asinīs, rezultāts būs pozitīvs.

Tomēr ar kvalitatīvas reakcijas palīdzību nav iespējams noskaidrot vīrusa genomu, slimības stadiju. Tāpēc HBV diagnosticēšanai veica gan kvantitatīvu, gan kvalitatīvu mērījumu.

Sagatavošanās aptaujai

PCR analīzei ir nepieciešamas vēnas asinis. Tas jādara no rīta tukšā dūšā.

Pacientam vajadzētu pienācīgi sagatavoties pētījumam:

1. 10 stundas, lai atteiktos no pārtikas, varat dzert tikai tīru ūdeni.
2. Pirms pārtraukt alkohola lietošanu, 4 stundas nav smēķēt.
3. Pirms pārbaudes jāizvairās no fiziska un emocionāla stresa.
4. Pārtrauciet medikamentu lietošanu 2 dienas, ja tas nav iespējams, ir jābrīdina laboratorijas palīgs. Dažas zāles ietekmē gala rezultātu.

Datu interpretācija

Kvantitatīvā reakcijā iegūtie rādītāji tiek vērtēti atkarībā no DNS kopiju skaita.

Kvalitātes mērījumu datus ir viegli interpretēt. Viņš sniedz vai nu pozitīvu, vai negatīvu atbildi.

Kvantitatīvā reakcijā ir iespējams novērtēt iegūtos rādītājus atkarībā no DNS kopiju skaita. Mērvienība ir kopijas / ml.

Dati tiek dekodēti šādi:

1. Ja HBV DNS daudzums ir mazāks par 90, tad infekcija nav sastopama. Pacientam izveidojās imunitāte pēc vakcinācijas vai tika izārstēta slimība.
2. Kad kopiju skaits 2x100 runā par vīrusa nesēju.
3. Numurs 2x106 norāda uz hronisku slimības stadiju.
4. Ja DNS ir vairāk nekā 2x109, pacientam ir akūta hepatīta stadija.

Kļūdaini rezultāti

Diagnostikas metodes priekšrocības, izmantojot polimerāzes reakcijas, ir šādas:

1. Tieša patogēnu noteikšana. Turpretī ELISA sniedz informāciju par vīrusa antivielu klātbūtni.
2. Specifiskums. Tas ir, tas ir DNS reģions, kas ir kopēts biomateriāla paraugā.
3. Paaugstināta jutība. Metode var pat atklāt atsevišķu šūnu fragmentus.
4. Slimību diagnostika akūtos un latentos posmos. Tas ir, ir iespējams diagnosticēt slimību pirmsklīnisko izpausmju stadijā.

Metodē ir trūkumi, kas rada nepatiesus rezultātus. Būtiskākais trūkums ir materiāla piesārņojuma varbūtība. Galvenais piesārņojuma avots ir slikti apstrādātas caurules, laboratorijas rokas, reaģenti.

Daļa no iepriekšējās reakcijas DNS var iekļūt asinīs. Tāpēc laboratorijām tiek izvirzītas paaugstinātas sanitārās prasības: atsevišķas telpas, plastmasas caurules, laboratoriju ultravioletā apstrāde utt.

Viltus negatīvus rezultātus var izraisīt reakcijas mazāka jutība. Tas notiek šādās situācijās:

• pacients lieto zāles, piemēram, antikoagulantus;
• pirms analīzes persona cieta fizisku stresu (spēlējot sportu, smagu darbu);
• infekcija nesen.

Ja pacientam ir liela infekcijas varbūtība, un pētījuma rezultāts ir negatīvs, viņš ir jāpārskata.

Skatiet arī:

Secinājums

Polimerāzes ķēdes reakcijas metode ir galvenais un informatīvākais HBV diagnostikai. Tas ļauj ne tikai noteikt infekcijas pārvadātāja statusu, bet arī izskaidrot slimības stadiju, lai novērtētu ārstēšanas rezultātus.

Precīzākai diagnozei tiek izmantots kvalitatīvs un kvantitatīvs mērījums. Metodes trūkumi ietver piesārņojuma varbūtību, samazinātu jutību un samērā augstu cenu.

Lai rezultāti būtu visticamākie, vajadzētu pienācīgi sagatavoties pētījumam un veikt to klīnikā ar atbilstošu licenci un labu reputāciju.

B hepatīta vīrusa pētījumi (ELISA un PCR) t

B hepatīta vīrusa antigēns (HBsAg)

B hepatīta virsmas antigēns serumā parasti nav sastopams.
B hepatīta virsmas antigēna (HBsAg) noteikšana serumā apstiprina akūtu vai hronisku B hepatīta vīrusa infekciju.

Akūtas slimības gadījumā HBsAg tiek konstatēts serumā inkubācijas perioda pēdējo 1-2 nedēļu laikā un klīniskā perioda pirmajās 2-3 nedēļās. HBsAg cirkulācija asinīs var būt ierobežota līdz dažām dienām, tāpēc jums jācenšas savlaicīgi pārbaudīt pacientus. ELISA metode ļauj noteikt HBsAg vairāk nekā 90% pacientu. Gandrīz 5% pacientu visjutīgākās pētījuma metodes HBsAg nenovēro, šādos gadījumos vīrusu hepatīta B etioloģiju apstiprina anti-HBcAg JgM vai PCR klātbūtne.

HBsAg koncentrācijai serumā visos hepatīta B smaguma līmeņos slimības augstumā ir ievērojams svārstību diapazons, tomēr ir zināms modelis: akūtā periodā pastāv pretēja attiecība starp HBsAg koncentrāciju serumā un slimības smagumu.

Augstas HBsAg koncentrācijas ir biežākas vieglas un vidēji smagas slimības formas. Smagās un ļaundabīgās formās HBsAg koncentrācija asinīs bieži ir zema, un 20% pacientu ar smagu formu un 30% ar ļaundabīgu antigēnu asinīs vispār nevar noteikt. Pacientiem ar HBsAg antivielām šajā fonā tiek uzskatīta nelabvēlīga diagnostikas zīme; tas ir noteikts B hepatīta ļaundabīgās formās.

Akūtā B hepatīta gaitā HBsAg koncentrācija asinīs pakāpeniski samazinās līdz šī antigēna pilnīgai izzušanai. Vairumā pacientu HBsAg pazūd 3 mēnešu laikā pēc akūtas infekcijas sākuma.

HBsAg koncentrācijas samazināšanās par vairāk nekā 50% līdz akūtā perioda 3. nedēļas beigām parasti norāda uz infekcijas procesa ciešu pabeigšanu. Parasti pacientiem ar augstu HBsAg koncentrāciju slimības augstumā to konstatē asinīs vairākus mēnešus.
Pacientiem ar zemu HBsAg koncentrāciju pazūd daudz agrāk (dažreiz vairākas dienas pēc slimības sākuma). Kopumā HBsAg noteikšanas laiks ir no vairākām dienām līdz 4-5 mēnešiem. Maksimālais HBsAg noteikšanas periods ar vienmērīgu akūtā B hepatīta kursu nepārsniedz 6 mēnešus pēc slimības sākuma.

HBsAg var atrast veselos cilvēkos, parasti profilaktiskos vai nejaušos pētījumos. Šādos gadījumos tiek pētīti citi vīrusu hepatīta B, anti-HBcAg JgM, anti-HBcAg JgG, anti HBeAg marķieri un pētīta aknu darbība.

Negatīvu rezultātu gadījumā ir nepieciešami atkārtoti HBsAg pētījumi.
Ja atkārtotas asins analīzes ilgāk par 3 mēnešiem atklāj HBsAg, šis pacients ir klasificēts kā hronisks slimnieks ar vīrusu B hepatītu.
HBsAg klātbūtne ir diezgan izplatīta. Pasaulē ir vairāk nekā 300 miljoni pārvadātāju, un mūsu valstī ir aptuveni 10 miljoni pārvadātāju.
HBsAg cirkulācijas pārtraukšana ar turpmāko serokonversiju (anti-HBs veidošanās) vienmēr norāda uz organisma sanāciju.

Asins analīzi HBsAg klātbūtnei izmanto šādos nolūkos:

akūtas hepatīta B diagnosticēšanai:

• inkubācijas periods;
• akūta slimība;
• agrīna atveseļošanās;
  

diagnosticējot hronisku B hepatītu;

slimībām:

• pastāvīgs hronisks hepatīts;
• aknu ciroze;

riska grupu pacientu pārbaudei un identificēšanai:

pacientiem ar biežām hemotransfūzijām;

pacientiem ar hronisku nieru mazspēju;

pacientiem ar daudzkārtēju hemodialīzi;

pacientiem ar imūndeficīta stāvokli, ieskaitot AIDS.

Pētījumu rezultātu novērtēšana

Pētījuma rezultāti ir izteikti kvalitatīvi - pozitīvi vai negatīvi. Negatīvs rezultāts norāda uz HBsAg seruma neesamību. Pozitīvs rezultāts - HBsAg identificēšana norāda uz akūtu vīrusu hepatīta B inkubāciju vai akūtu periodu, kā arī hronisku vīrusu hepatītu B.

Antivielas pret B hepatīta vīrusa JgG kodolantigēnu (anti-HBcAg JgG)

Parasti serumā nav anti-HBcAg seruma.
Pacientiem ar anti-HBcAg JgG parādās akūtajā B hepatīta periodā un saglabājas visa mūža garumā. Anti-HBcAg JgG ir vadošais pārnestā HBV marķieris.

Lai noteiktu diagnozi, izmanto anti-HBcAg JgG asins analīzes:

hronisks vīrusu hepatīts B HBs antigēna klātbūtnē serumā;

vīrusu hepatīts B.

Pētījumu rezultātu novērtēšana

Pētījuma rezultāti ir izteikti kvalitatīvi - pozitīvi vai negatīvi. Negatīvs rezultāts norāda uz seruma anti-HBcAg JgG trūkumu. Pozitīvs rezultāts - anti-HBcAg JgG identificēšana norāda uz akūtu infekciju, atveseļošanos vai iepriekš inficētu B hepatītu.

B hepatīta vīrusa "e" antigēns (HBeAg)

Parasti HBeAg serumā nav.
HBeAg var atrast lielākajā daļā pacientu ar akūtu vīrusu hepatītu B. Tas parasti pazūd asinīs pirms HBs antigēna. Augsts HBeAg līmenis slimības pirmajās nedēļās vai tā atklāšana ilgāk par 8 nedēļām dod iemeslu aizdomām par hronisku infekciju.

Šis antigēns bieži tiek atklāts hroniskā vīrusa etioloģijas hepatītā. Īpaša interese par HBeAg definīciju ir fakts, ka tās noteikšana raksturo infekcijas procesa aktīvo replikācijas fāzi. Ir pierādīts, ka augstās HBeAg koncentrācijas atbilst augstai DNS polimerāzes aktivitātei un raksturo vīrusa aktīvo replikāciju.

HBeAg klātbūtne asinīs norāda uz tā augsto inficētspēju, t.i. aktīvās hepatīta B infekcijas klātbūtne pārbaudāmajā organismā un tiek atklāta tikai HBs antigēna klātbūtnē asinīs. Pacientiem ar hronisku aktīvu hepatītu pretvīrusu zāles lieto tikai tad, ja asinīs tiek konstatēts HBeAg. HBeAg - antigēns - B hepatīta vīrusa akūtas fāzes un replikācijas marķieris.

Lai diagnosticētu HBe antigēna klātbūtni, izmanto asins analīzi:

B hepatīta inkubācijas periods;

B hepatīta prodroma periods;

akūtu B hepatīta periodu;

hronisks pastāvīgs B hepatīts.

Pētījumu rezultātu novērtēšana

Pētījuma rezultāti ir izteikti kvalitatīvi - pozitīvi vai negatīvi. Negatīvs rezultāts norāda uz HBeAg seruma neesamību. Pozitīvs rezultāts - HBeAg noteikšana norāda uz akūta vīrusa hepatīta B inkubāciju vai akūtu periodu vai nepārtrauktu vīrusa replikāciju un pacienta infekciozitāti.

Antivielas pret B hepatīta vīrusa antigēnu "e" (anti-HBeAg)

Anti-HBeAg serumā parasti nav. Anti-HBeAg antivielu parādīšanās parasti liecina par B hepatīta vīrusa intensīvu izņemšanu no ķermeņa un nelielu pacienta infekciju.

Šīs antivielas parādās akūtā periodā un saglabājas līdz 5 gadiem pēc infekcijas. Hroniska ilgstoša hepatīta gadījumā anti-HBeAg ir atrodams pacienta asinīs kopā ar HBsAg. Serokonversija, t.i. HBeAg pāreja pret anti-HBeAg, ar hronisku aktīvu hepatītu, biežāk prognozējami labvēlīga, bet tā pati serokonversija nepalielina smago cirozes aknu transformācijas prognozi.

Vīrusu hepatīta B diagnosticēšanai sekojošos gadījumos izmanto asins analīzes, lai noteiktu anti-HBeAg klātbūtni:

noteikt slimības sākotnējo posmu;

akūta infekcija;

agrīna atveseļošanās;

atveseļošanās;

vēlu atjaunošanās.

nesen pārnestā B hepatīta diagnoze;

hroniska pastāvīga B hepatīta diagnoze.

Pētījumu rezultātu novērtēšana

Pētījuma rezultāti ir izteikti kvalitatīvi - pozitīvi vai negatīvi. Negatīvs rezultāts liecina, ka serumā nav antivielu pret HBeAg. Pozitīvs rezultāts ir antivielu noteikšana pret HBeAg, kas var norādīt uz akūta vīrusa hepatīta B sākuma stadiju, akūtu infekcijas periodu, atveseļošanās agrīno stadiju, atveseļošanos, nesen pārnesto B hepatītu vai pastāvīgu B hepatītu.

Hroniska B hepatīta klātbūtnes kritēriji ir:

HBV DNS noteikšana vai periodiska noteikšana asinīs;

nepārtraukta vai periodiska ALAT / AST aktivitātes paaugstināšanās asinīs; t

hroniska hepatīta morfoloģiskās pazīmes aknu biopsijas histoloģiskajā izmeklēšanā.

B hepatīta vīrusa noteikšana pēc PCR (kvalitatīvi) t

B hepatīta vīruss parasti nav klāt.
B hepatīta vīrusa kvalitatīvā noteikšana, izmantojot PCR metodi, ļauj apstiprināt vīrusa klātbūtni pacienta organismā un tādējādi nosaka slimības etioloģiju.

Šis pētījums sniedz noderīgu informāciju par akūta vīrusa hepatīta B diagnostiku slimības inkubācijas un agrīnās attīstības stadijās, kad pacienta galvenie seroloģiskie marķieri asinīs var nebūt. Vīrusa DNS serumu konstatē 50% pacientu bez HBeAg. PCR metodes analītiskā jutība nav mazāka par 80 vīrusu daļiņām 5 μl, pēdējais DNS noteikšanas paraugs, specifiskums - 98%.

Šī metode ir svarīga, lai diagnosticētu un uzraudzītu hronisku HBV gaitu. Aptuveni 5-10% cirozes un citu hronisku aknu slimību gadījumu izraisa hronisks B hepatīta vīrusa nesējs, un šādu slimību aktivitātes marķieri ir HBeAg un B hepatīta vīrusa DNS klātbūtne asinīs.

PCR metode ļauj noteikt kvalitatīvi un kvantitatīvi hepatīta B vīrusa DNS asinīs. Noteiktais fragments abos gadījumos ir B hepatīta vīrusa strukturālo proteīnu gēna unikālā DNS secība.

B hepatīta vīrusa DNS noteikšana biomateriālā, izmantojot PCR, ir nepieciešama, lai:

apšaubāmu seroloģisko testu rezultātu izšķiršana;

slimības akūtās stadijas noteikšana, salīdzinot ar iepriekšējo infekciju vai kontaktu;

kontrolēt pretvīrusu terapijas efektivitāti.

B hepatīta DNS izzušana no asinīm ir terapijas efektivitātes pazīme

B hepatīta vīrusa noteikšana pēc PCR (kvantitatīvs)

Šī metode sniedz svarīgu informāciju par slimības attīstības intensitāti, ārstēšanas efektivitāti un rezistenci pret aktīvajām zālēm.
Lai diagnosticētu vīrusu hepatītu, izmantojot PCR serumā, tiek izmantotas testēšanas sistēmas, kuru jutība paraugā ir 50-100 kopiju, kas ļauj noteikt vīrusu 5 x 10 ^ 3 -10 ^ 4 kopiju / ml koncentrācijā. Vīrusu hepatīta B PCR noteikti ir nepieciešams, lai spriestu par vīrusu replikāciju.

Vīrusa DNS serumu konstatē 50% pacientu bez HBeAg. Asins serums, limfocīti un hepatobiopija var kalpot kā materiāls B hepatīta vīrusa DNS noteikšanai.

• Virēmijas līmeņa novērtējums ir šāds:
• mazāk nekā 2,10 ^ 5 kopijas / ml (mazāk nekā 2,10 ^ 5 SV / ml) - zema virēmija;
• no 2,10 ^ 5 kopijām / ml (2,10 ^ 5 SV / ml) līdz 2,10 ^ 6 kopijām / ml (8,10 ^ 5 SV / ml) - vidēja virēmija;
• vairāk nekā 2,10 ^ 6 kopijas / ml - augsta virēmija.

Pastāv saistība starp akūta vīrusa hepatīta B iznākumu un HBV DNS koncentrāciju pacienta asinīs. Ar zemu virēmijas līmeni infekcijas hronizācijas process ir tuvu nullei, vidēji process tiek hronizēts 25-30% pacientu, un ar augstu virēmijas līmeni akūts B hepatīts visbiežāk kļūst hronisks.

Hroniskas HBV interferona alfa terapijas indikācijas jāuzskata par aktīvas vīrusu replikācijas marķieru klātbūtni (HBV HBV, HBeAg un HBV DNS noteikšana asins serumā pēdējo 6 mēnešu laikā).

Ārstēšanas efektivitātes novērtēšanas kritēriji ir HBEAg un HBV DNS izzušana asinīs, ko parasti papildina transamināžu līmeņa normalizācija un slimības ilgstoša remisija, HBV DNS izzūd no asinīm līdz 5. ārstēšanas mēnesim 80% pacientu. Virēmijas līmeņa samazināšana par 85% vai vairāk līdz trešajai dienai no ārstēšanas sākuma, salīdzinot ar sākotnējo, ir ātrs un diezgan precīzs kritērijs terapijas efektivitātes prognozēšanai.